[发明专利]一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程

说明书

本发明公开了一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程，包括五条驴源性特征肽，一组驴源性特征肽在驴皮鉴别方面中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将皮样去毛、皮下脂肪及杂质；步骤二：采用胰蛋白酶酶解：步骤三：进行液质联用检测；步骤四：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测。一组驴源性特征肽在阿胶鉴别方面中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：采用胰蛋白酶酶解；步骤二：进行液质联用检测；步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测。本发明的有益效果是，通过酶解不同物种胶原蛋白的结果进行对比获得一组驴源性特征肽，将驴的特征性多肽序列应用到驴皮和阿胶的定性检测中去。

技术领域

本发明涉及生物材料应用，特别是一组驴源性特征肽及其驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程。

背景技术

阿胶由驴皮熬制而成，具有滋阴补血等多重，深受广大消费者的欢迎，目前阿胶及阿胶相关的药品、食品、保健食品等系列产品年产值已经超过300亿。由于阿胶的需求大，驴皮的供应量少。一些不法企业在巨大利益的诱惑下不使用驴皮，而使用价格低的马皮、牛皮、猪皮做原料生产阿胶，导致这些假胶不含驴皮源成分，因此寻找专属性强、灵敏度高的检测阿胶中驴源性成分的方法具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程。

实现上述目的本发明的技术方案为，一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程，一组驴源性特征肽，包括五条驴源性特征肽，所述五条驴源性特征肽分别为驴源性特征肽1GPTGEPGKPGDK；驴源性特征肽2GATGPAGVR；驴源性特征肽3GEAGPQGAR；驴源性特征肽4GEIGNPGR；驴源性特征肽5GEIGNPGR(P羟基化)。

所述驴源性特征肽1是驴相对于马、牛、羊、猪所特有，驴源性特征肽2是驴相对于马和猪所特有，驴源性特征肽3和驴源性4是驴相对于牛、羊、猪所特有，驴源性特征肽5是驴相对于牛、羊所特有。

一组驴源性特征肽在驴皮鉴别方面中的应用流程，包括如下步骤：

步骤一：将皮样去毛、皮下脂肪及杂质；

步骤二：采用胰蛋白酶酶解：称取皮类样品，利用丙酮进行脱脂处理，加入超纯水将皮溶解，冷冻干燥后称取1.5mg加入去离子水配成一定浓度的蛋白样品，加入变性缓冲液，进行超滤置换为碳酸氢氨缓冲液，加入胰蛋白酶37℃温浴酶解，超滤管离心过滤收集滤液；

步骤三：进行液质联用检测：采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0→5min，流动相A为95％；5→8min，流动相A为95％→92％；8→10min，流动相A为92％→50％；10→12min，流动相A为50％；12→12.1min，流动相A为50％→95％；12.1→15min，流动相A为95％,流速为0.3ml/min；

步骤四：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，根据检测结果可以从驴皮、马皮、牛皮、羊皮和猪皮中区分驴皮，如果五条特征肽全部检出，则该皮样为驴皮：驴源性特征肽1选择m/z380.7→374.82,493.56；驴源性特征肽2选择m/z393.24→384.42,499.3；驴源性特征肽3选择m/z421.71→585.17,656.26；驴源性特征肽4选择m/z400.26→500.2,613.27；驴源性特征肽5选择m/z408.26→345.18,516.22；作为离子对进行MRM扫描。

步骤二中，所述变性缓冲液为0.5MTris-HCl，2.75mM乙二胺四乙酸，0.5M盐酸胍，pH8.0的缓冲液。

步骤四中，所述电喷雾正离子模式以三重四极杆质谱作为检测器，所述其电喷雾离子源为ESI+。

一组驴源性特征肽在阿胶鉴别方面中的应用流程，包括如下步骤：