[发明专利]检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测黄曲霉毒素B1的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、黄曲霉毒素B1标准品、黄曲霉毒素B1的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测黄曲霉毒素B1的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 （aspergillus flavus）寄生曲霉 （a.parasiticus）产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。

B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。AFT存在于土壤、动植物、各种坚果中，主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对黄曲霉毒素B1检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中黄曲霉毒素B1残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中黄曲霉毒素B1残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、黄曲霉毒素B1标准品溶液、抗黄曲霉毒素B1的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1) 免疫原的制备：将半抗原黄曲霉毒素B1与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（黄曲霉毒素B1-BSA）；

(2) 包被原的制备：将半抗原黄曲霉毒素B1与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（黄曲霉毒素B1-OVA）；

(3) 单克隆抗体的制备：

a. 用步骤(1)的免疫原（黄曲霉毒素B1-BSA）免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

b. 以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体IgG；

c. 用步骤(2)的包被原包被96孔包被板；