[发明专利]一种红细胞膜及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种红细胞膜及其制备方法和应用。本发明通过反复冻融法，并进一步结合匀浆破碎法和滤膜过滤，可以制备得到一种粒径均匀分布并且具有良好的抗原性、特别是具有良好的稀有血型系统抗原性的红细胞膜，解决了现有技术中红细胞膜通常只具有ABO血型抗原而不具备稀有血型抗原性的问题，同时还解决了现有红细胞膜粒径分布不均匀的问题，提供了一种粒径分布均匀并且具有全血型系统抗原性的红细胞膜，可以用于意外抗体的筛查和鉴定，保证了输血安全。

技术领域

本发明属于医学与生物学技术领域，涉及红细胞膜的制备，具体地涉及一种红细胞膜及其制备方法和应用。

背景技术

细胞膜的主要成分为蛋白质(约49％重量比)、脂类(约44％重量比，主要有磷脂、胆固醇、糖脂等)和糖类，具有重要的生物学功能，与物质代谢、能量转换、细胞识别、细胞免疫、肿瘤发生等均高度相关，在分子生物学、细胞生物学、免疫学以及临床医学检测等领域均有广泛的研究以及应用价值。对于人体而言，红细胞的数量大、取材容易，并且人体成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，在因细胞内外渗透压不平衡而导致细胞膨胀破裂、胞浆外漏(即医学上所称的溶血现象)时，遗留的红细胞膜中无细胞器膜等杂质干扰，因此红细胞膜是最适于作为研究细胞膜的材料。现已证明，红细胞膜具有血型抗原活性，可与相应血型抗体反应，从而在红细胞血型鉴定中发挥重要作用，这也是目前对于红细胞膜研究的最重要应用；Siegel在1981年提出“红细胞免疫系统”的概念之后，现已公认红细胞膜蛋白亦具有免疫调节功能，在体内可发挥红细胞免疫功能，结合循环免疫复合物，并可调节T淋巴细胞及B淋巴细胞的功能；CN 101327317 B发现同物种的红细胞膜蛋白在具有相应血型抗体的人体内具有很好的杀瘤效应，并公开了一种由人红细胞膜蛋白和缓冲液组成的治疗肿瘤的注射液，等等。不难看出，前述相关领域的研究，均须建立在获得具有抗原性的红细胞膜的基础上进行。

现有技术中红细胞膜的制备主要是通过低渗溶解红细胞，高速离心洗涤去除血红蛋白后用等渗的盐水或PBS重悬。CN101109755A公开一种红细胞膜处理的方法，包括加预冷的0.01mol/L Tric-HCl与红细胞混合，4℃放置2h，再离心20min至无肉眼可见的红细胞为止。肖毅等(两种提取红细胞膜蛋白方法的比较，细胞与分子免疫学杂志，1997(2)：44-45)比较了两种提取红细胞膜蛋白的方法，其中一种是沉淀物加入预冷蒸馏水，离心后，因沉淀物中仍有少量红细胞，加入0.01N冰醋酸，置4℃2h后离心，沉淀物加NS混匀后，再加0.1NNaOH，室温30min，离心弃上清后加NS，用0.1N HCl(约0.1ml)调pH至7.4。现有提取红细胞膜的方法通常采用有机溶剂，容易破坏细胞膜表面结构，极易丧失抗原性，特别是丧失稀有血型系统(ABO血型系统以外的其他血型系统)的抗原性，这将导致无法进行不规则抗体(意外抗体)的筛查，极大地增加了输血风险；同时现有方法提取的红细胞膜通常存在粒径分布不均匀的问题。

为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种粒径分布均匀并且具有良好抗原性(特别是稀有血型系统抗原性)的红细胞膜，以及其制备方法和应用。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种红细胞膜，该红细胞膜表面具有稀有血型抗原性，解决了现有红细胞膜通常仅具有ABO血型抗原性而不具备稀有血型抗原性的问题。

本发明的另一个目的在于提供一种粒径分布均匀的红细胞膜。

本发明的同时提供所述红细胞膜的制备方法。

本发明的再一个目的在于提供上述红细胞膜在血型抗体检测和鉴定技术领域的应用，其可以用于意外抗体的筛查和鉴定。

本发明的一方面提供了一种红细胞膜，其具有良好的稀有血型抗原性，且粒径分布均匀。

本发明所述的一种红细胞膜，由如下方法制备而成：(1)取压积红细胞，加入生理盐水于－20℃-－200℃冰冻，再于20℃-40℃融化；(2)离心，去上清，洗涤，得到的白色的沉淀物。