[发明专利]MMHRL3转基因小鼠肝肿瘤细胞系的建立及应用

权利要求书

1.一种转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞，其特征在于，所述肝肿瘤细胞是H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞MMHRL3，它保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:C2016192；

所述H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞MMHRL3的制备方法具体包括以下过程：无痛苦处死上述H-ras12V转基因雄性小鼠，无菌术切下肝肿瘤；将肝肿瘤置于装有常温灭菌生理盐水的10cm培养皿中，充分清理掉肿瘤包膜，使用手术刀将上述操作后留取的肝肿瘤组织切割至1×1×1mm³大小的组织块，加入肝肿瘤组织培养液通过半干法培养；肝肿瘤组织培养液成分为DMEM high glucose培养基，添加10％热灭活胎牛血清、100IU/ml青-链霉素、50mg/ml庆大霉素；新接种的肝肿瘤组织块24h后换液，H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞培养过程中隔72h换液；半干法培养8天后即可以在肝肿瘤组织块周围观察到有细胞爬出；此时对上述肝肿瘤组织进行常规细胞培养消化、铺板，并在多次消化、铺板过程中去除原有肝肿瘤组织培养中的成纤维细胞；原代细胞第一次传代至第10代时即能够得到大量形态均一的上皮样细胞，命名为MMHRL3。

2.如权利要求1所述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞的子代细胞，其特征在于，所述子代细胞能够导致裸鼠形成肝癌。

3.如权利要求1所述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞或权利要求2所述的子代细胞，其特征在于，所述细胞具有以下特征：

(a)100％细胞表达H-ras12V转基因；

(b)具有免疫缺陷小鼠皮下成瘤能力。

4.如权利要求1所述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞或权利要求2所述的子代细胞的用途，其特征在于，用于在裸鼠体内产生肝肿瘤。

5.一种建立肝肿瘤动物模型的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)将2×10⁶-1×10⁸的权利要求1所述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞或权利要求2所述的子代细胞接种于裸鼠；

(b)饲养步骤(a)的裸鼠15-100天，获得肝肿瘤动物模型。