[发明专利]β‑人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒及制作方法

说明书

技术领域：

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，包括蛋白交联技术、膜层析技术、标记免疫分析技术等。具体地说是一种能够快速准确的对血清、血浆和全血等样品中β-人绒毛膜促性腺激素进行定量分析的β-人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒及制作方法。

背景技术：

人绒毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin，HCG)是由胎盘滋养层细胞所分泌的一类糖蛋白类激素，由α、β两个亚基组成，含糖量为30％左右。α-亚基由92个氨基酸残基组成，分子量14.5KD，它与FSH、LH及TSH的α-亚基结构相似；β-亚基为特异性链，由145个氨基酸组成，分子量22KD。女性受精的卵子移动到子宫腔内着床后，形成胚胎，在发育成为胎儿的过程中，孕妇胎盘绒毛膜滋养层合体细胞合成，产生大量的hCG进入母体并通过孕妇的血液循环而排泄到尿中。当妊娠1-2周时血液和尿中的hCG水平即可迅速升高，第8-12周可达到高峰。直至孕期3个月降至中等水平，并一直维持到妊娠末期。检测β-hCG的重要意义可以了解胎儿发育的状况以及是否存有与妊娠相关的多种疾病，如流产、保胎成功与否、宫外孕、滋养层细胞肿瘤、葡萄胎等多种疾病的辅助诊断。

正常发育的绒毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不断快速上升，每48小时上升66％以上。既如果β-HCG每两天增加的量大于66％，可以诊断为宫内妊娠；而如果增加的量小于66％，则宫外孕或宫内孕发育不良的可能性很大，对于宫外孕，由于输卵管肌层菲薄，血供不良，HCG分泌量很低，每天升值较小，48小时上升不到50％(但有一部分人最初的HCG上升正常)。如果用HCG难以确认，还可用血孕酮来做辅助性诊断，进一步还可以进行B超检查。如果HCG增加速度非常快，表明有葡萄胎的可能，必须紧密监测。当然也有可能是双胞胎。另外：HCG升高还有下列几种可能：正常怀孕双胞胎、葡萄胎或某些疾病或肿瘤。如在内分泌疾病中，如脑垂体疾病、甲状腺功能亢进、妇科疾病如卵巢囊肿、子宫癌等HCG也可增高。近年来发现恶性肿瘤如默契胎瘤、胰腺瘤、胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等血中HCG也可升高。因此在肿瘤科，将HCG看作是癌标志物之一。但必须结合临床情况及其它检查结果，通过综合分析才能正确分析。产后9天或人工流产术后25天，血清HCG应恢复正常。如不符合这一情况，则应考虑有异常可能。建议流产手术后进行2次HCG定量检查，有下降趋势至＜25mIU/mL可判断流产成功。

β-hCG水平的增长变化，不像人体其他激素那样的变化幅度很小，胚胎发育正常时，不同周数均有一定的正常范围；其次正常妊娠时β-hCG的增长速率是极快的，β-hCG的浓度每时每刻都在增加。因此可以通过对β-hCG的检测和增长速率的观察来辅助区分正常妊娠和许多异常的病理情况。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Time resolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。