[发明专利]一种副猪嗜血杆菌四价灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌四价灭活疫苗。

背景技术

猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪Glasser's病的病原体，引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等。国外对HPS流行病学调查表明，临床病猪的分离率高达20％左右。随着我国集约化猪场的发展，副猪嗜血杆菌病的发生呈上升趋势，给养猪业造成了巨大的经济损失，是近年来严重危害养猪业发展的细菌性传染病之一。副猪嗜血杆菌至少有15个血清型，不同国家或地区流行的优势血清型不同，不同血清型的致病性和免疫学特性差异显著。目前，已经证实副猪嗜血杆菌在我国绝大多数猪场存在和流行。

美国、日本、加拿大、德国、澳大利亚、丹麦、西班牙等养猪业较发达的国家均已对本国的副猪嗜血杆菌流行病学进行了调查，表明副猪嗜血杆菌的分离率高达20％左右，而且流行的血清型通常都毒力较强，如血清型4型、5型和13型。日本、美国和西班牙的血清型以4型和5型最为流行；而丹麦和澳大利亚的分离菌株主要为血清5型和13型为主；德国主要是血清2型和4型。各国的流行调查结果显示，各国流行血清型各有差别，具有差异性。

近年来，我国学者对不同地区的副猪嗜血杆菌进行了流行病学调查，综合报道的研究结果显示血清4型、5型、12型和13型是目前我国最为流行的血清型。我们对全国不同地区的副猪嗜血杆菌进行流行病学调查研究，结果表明当前给我国养猪业发展带来危害的副猪嗜血杆菌的优势血清型为4型、5型、12型和13型。

发明内容

本发明的目的是提供一种副猪嗜血杆菌四价灭活疫苗，从而用于预防由4、5、12、13型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病。

本发明副猪嗜血杆菌四价灭活疫苗，其中抗原为灭活的副猪嗜血杆菌YBH04、YBH05、YBH12株和YBH13株；

其中4型YBH04株的保藏编号为CGMCC No.5479、5型YBH05株的保藏编号为CGMCC No.5480；13型YBH13株的保藏编号为CGMCC No.5501；

副猪嗜血杆菌YBH12(Haemophilus parasuis YBH12)株，于2016年11月10日保藏在中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016636。

上述的副猪嗜血杆菌YBH04、YBH05、YBH12株和YBH13株是使用甲醛溶液进行了灭活；

上述灭活疫苗中YBH04、YBH05、YBH12株和YBH13菌株的数量优选为2.5-3.0×10⁹CFU/ml。

本发明从优势流行菌株中筛选出免疫原性良好的副猪嗜血杆菌4型YBH04株、5型YBH05株、12型YBH12株和13型YBH13株作为疫苗制备菌株，分别接种于TSB营养肉汤培养基上培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活，加入201佐剂混合乳化制成；用于预防由4、5、12、13型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病；此疫苗具有安全性好、免疫效力高且免疫期长等优点。

具体实施方式

本发明所使用的抗原菌株的信息如下：

一、副猪嗜血杆菌血清12型YBH12株的筛选

1.流行病学调查 自2008年以来，我们对副猪嗜血杆菌的流行病学进行调查，并对部分猪场进行跟踪调查。调查结果发现，血清4、5、12、13型是目前流行血清型。而4、5、13型均已筛选出适宜的制苗菌株，而且三价灭活疫苗已有研制；但副猪嗜血杆菌血清12型的菌株还未进行筛选。

2.细菌分离 采集疑似病猪的肺脏、胸腹腔积液、心包积液、心血、关节液和脑组织等病料，接种TSA培养基，于5％CO₂条件下，37℃培养24～48h，挑取单个菌落，进行培养并鉴定。

3.细菌鉴定

3.1形态观察 取疑似菌落，涂片后革兰氏染色镜检，观察其细菌形态。

3.2生化特性鉴定 取疑似菌落按常规进行溶血性试验、尿素酶试验、氧化酶试验、V-P试验、接触酶试验、硝酸盐还原试验、吲哚试验、卫星生长试验；糖发酵试验，包括葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、核糖和麦芽糖。同时用HPS 12型国际参考菌株作对照菌株，于37℃培养24～48h，观察结果。