[发明专利]一种克百威定性定量分析的方法及该方法所用的试剂盒

权利要求书

1.一种克百威生物条形码免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含有：

克百威标准品、克百威纳米探针、克百威双标胶体金纳米探针；

所述克百威纳米探针由磁性纳米粒子和克百威完全抗原偶联而成；

所述克百威双标胶体金纳米探针由抗克百威抗体和双链DNA包被胶体金颗粒得到；

所述双链DNA由硫醇修饰的单链DNA和条形码单链DNA互补配对而成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述克百威完全抗原由克百威和载体蛋白偶联而成。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，述载体蛋白为鸡卵白蛋白。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁性纳米粒子的粒径为18～22nm。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胶体金颗粒的粒径为13～15nm。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗克百威抗体为单克隆抗体。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述克百威双标胶体金纳米探针具体由以下方法制备得到：

1)、取胶体金溶液调pH至8.8～9.2后向其中加入抗克百威抗体，搅拌混合，静置25～35min；然后加入硫醇修饰的单链DNA链，8～12℃静置36～44h；再调整pH至7.3～7.5，加入NaCl至浓度0.08～0.12mol/L，8000～11000r/min离心8～12min，弃上清，得到含寡核苷酸的胶体金；

2)、用牛血清白蛋白浓度为0.8～1.2％的磷酸盐缓冲溶液重悬所述含寡核苷酸的胶体金，孵育1～3h；再加入与所述硫醇修饰的单链DNA链互补的生物条形码DNA链，室温杂交3～5h，8000～11000r/min离心，弃上清，得到所述克百威双标胶体金纳米探针。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：

在加入NaCl至既定浓度时，在120～180min内分2～4次等量加入，每次间隔40～60min。

9.一种克百威定性定量分析的方法，其特征在于，将权利要求1～8任一项所述的试剂盒与荧光定量PCR技术联用。

10.根据权利要求9所述的克百威定性定量分析的方法，其特征在于，该方法具体包括：

a)、将克百威标准品、提取与净化后的待测样品分别与等体积的克百威双标胶体金探针和克百威纳米探针混合孵育；

b)、洗涤孵育产物并去杂化得到与各标准品与待测样品对应的生物条形码；

c)、使用荧光定量PCR对生物条形码进行测定；

d)、以克百威标准品的浓度为横坐标，各浓度所对应的Ct值为纵坐标，建立标准曲线，并根据标准曲线计算各样品中的克百威浓度。