[发明专利]一种检测力竭运动小鼠心肌连接蛋白43含量的方法

说明书

本发明属于化学发光传感器技术领域，首先利用抗体修饰钴纳米粒子，并利用戊二醛法将抗体修饰在氨基化磁珠表面。检测时，将含有心肌连接蛋白43的样品加入到抗体修饰的磁珠溶液中，然后加入抗体修饰钴纳米粒子，形成三明治夹心结构，随后进行分离，然后根据钴纳米粒子催化鲁米诺产生化学发光，根据化学发光强弱实现对心肌连接蛋白43含量的测定；并对力竭运动后小鼠心肌中心肌连接蛋白43含量进行测定，方法具有简单，成本低，灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属于化学发光传感器领域，具体涉及一种检测力竭运动小鼠心肌连接蛋白43含量的方法。

背景技术

心肌连接蛋白43(connexin 43，Cx43)是组成缝隙连接的连接蛋白家族成员中的一种，是心肌细胞间隙连接的主要蛋白成分[李梁,常芸.力竭运动后不同时相大鼠心肌连接蛋白43的变化[J].中国运动医学杂志,2007(4):397-401.]。心肌连接蛋白43是心肌细胞间电耦联及化学信息交换的重要结构基础[潘国聘,孙丽华,张勇,等.缝隙连接蛋白43在急性局灶性脑缺血大鼠心室肌中的表达[J].哈尔滨医科大学学报,2008,42(4):330-333.ShiH,Shi D,Wu Y,et al.Qigesan inhibits migration and invasion of esophagealcancer cells via inducing connexin expression and enhancing gap junctionfunction[J].Cancer Letters,2016,380(1):184–190.]。心肌连接蛋白43的正常表达与分布是间隙连接通道电偶联功能正常、心脏正常电活动和协调舒缩的重要保证。现有的研究心肌连接蛋白43表达的方法有荧光免疫法[林吉进,李玉光,霍霞,等.双重标记连接蛋白43激光共聚焦显微镜检测方法的研究[J].汕头大学医学院学报,2001,14(3):177-179.CoyleD,Doyle B,Murphy J M,et al.Expression of Connexin 26and Connexin 43is Reducedin Hirschsprung’s Disease[J].Journal of Surgical Research,2016]，流式细胞仪测定法[杨军,伍卫,梁蔚文,等.血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化[J].中山大学学报(医学科学版),2007,28(3):292-296.]等，然而未见利用高灵敏度的化学发光法和高选择性抗原抗体识别反应相结合的检测方法，本研究用钴纳米粒子标记抗体，以鲁米诺-Co-双氧水化学发光体系，建立了一种高灵敏检测心肌连接蛋白43的新方法，并用于力竭运动后小鼠心肌连接蛋白43含量的测定。

发明内容

本发明旨在建立一种方法操作简单，成本低廉，灵敏度高的测定心肌连接蛋白43的方法。

实现发明目的技术方案是：

一种检测力竭运动后小鼠心肌连接蛋白43含量的方法。其原理是，首先利用抗体修饰钴纳米粒子，并利用戊二醛法将抗体修饰在氨基化磁珠表面。检测时，将含有心肌连接蛋白43的样品加入到抗体修饰的磁珠溶液中，然后加入抗体修饰钴纳米粒子，形成三明治夹心结构，随后进行分离，然后根据钴纳米粒子催化鲁米诺产生化学发光，根据化学发光强弱实现对心肌连接蛋白43含量的测定；并对力竭运动后小鼠心肌中心肌连接蛋白43含量进行测定。

测定步骤为：

(1)钴纳米粒子的制备

首先，将制备钴纳米粒子实验所用的玻璃仪器用王水泡洗2h，烘干备用。然后在10mL的浓度为1％的氯化钴CoCl₂·6(H₂O)中加入1.0mL浓度为10％的氢氧化钠，50℃条件下，搅拌反应30分钟，室温下冷却，得钴纳米粒子溶液，4℃条件下保存备用。

(2)抗体修饰钴纳米粒子的制备