[发明专利]一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法

权利要求书

1.一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一，对照品溶液的配制；

步骤二，样品处理；

步骤三，确定液相色谱条件；

所述，步骤一包括以下步骤：

采用USP 标准品作为氨糖对照品，精密称定适量的D-氨基葡萄糖盐酸盐对 照品置一容量瓶中，加入醋酸钠溶液，超声溶解；

用醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀作为标准储备液；吸取适量标准储备液至另 一容量瓶中，加异硫氰酸苯酯，再加甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，水浴中加热， 冷却至室温；

转移上述溶液适量至离心管中，加入庚烷，振摇，将甲醇层转移至HPLC瓶中， 进样；

所述，步骤二包括以下步骤：

精密称取一定量的供试品置一容量瓶中，加入适量醋酸钠溶液，超声溶解；

用醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀；

吸取适量上述溶液至另一容量瓶中，加异硫氰酸苯酯，再加甲醇，超声溶 解，加甲醇/水至刻度，混匀，水浴中加热，冷却至室温；

转移上述溶液适量至离心管中，加入庚烷，振摇，将甲醇层转移至HPLC瓶 中，进样；

所述，步骤三包括以下步骤：

选择高效液相色谱仪和带紫外检测器；

选择产品参数为C18，50mm×4.6mm，2.7μm的色谱柱；

设定流速为 1.0mL/min；

设定第一流动相为磷酸溶液；第二流动相为乙腈；梯度如下表所示：

设定检测波长为UV240nm；

设定柱温为25℃；

设定进样量为2μL；

氨糖的含量的计算公式如下式所示：

其中：A对、A样分别为对照品、样品的峰面积；

W对为对照品的重量，mg；

W样为样品的重量，g；

C对为对照品的含量；

氨基葡萄糖盐酸盐含量单位为mg/ g；

氨基葡萄糖硫酸钾盐含量单位为mg/ g；

氨基葡萄糖含量单位为mg/ g；

标准储备液的配制为：精密称定适量的D-氨基葡萄糖盐酸盐对照品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸钠溶液，超声溶解，用0.1mol/L醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀作 为标准储备液，其浓度为1.0mg/ml；

所述步骤一中的溶液的配制为：吸取标准储备液适量至另一容量瓶中，加350μl异硫氰酸苯 酯，再加10ml甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，80℃水浴中加热10min，冷却至室温； 转移上述溶液5ml溶液至离心管中，加入5ml庚烷，振摇2min，将甲醇层转移至HPLC瓶中，进 样；

所述步骤二中的样品处理为：称取一定量的供试品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸钠溶液， 超声溶解；用0.1mol/L醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀；吸取上述溶液至另一容量瓶中，加350 μl异硫氰酸苯酯，再加10ml甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，80℃水浴中加热 10min，冷却至室温；转移上述溶液5ml溶液至离心管中，加入5ml庚烷，振摇2min，将甲醇层 转移至HPLC瓶中，进样。