[发明专利]人乳头瘤病毒重组四价疫苗、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种制备人乳头瘤病毒的四价疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供表达载体，所述的表达载体分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示的DNA序列(较佳地形成4种重组表达载体)，能表达所述DNA序列所编码的蛋白；

(2)将步骤(1)的表达载体转入毕赤酵母中，进行表达，获得人乳头瘤病毒6的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒11的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒16的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒18的L1蛋白的病毒样颗粒；

(3)混合步骤(2)获得的人乳头瘤病毒6的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒11的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒16的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒18的L1蛋白的病毒样颗粒，获得人乳头瘤病毒的四价疫苗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以pPink-HC为表达载体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，进行诱导表达；较佳地以甲醇进行诱导表达；更佳地，诱导表达的方法是：1％甲醇诱导24±4h，之后补充0.6-1％终浓度的甲醇后继续培养24±4小时

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，人乳头瘤病毒6的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒11的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒16的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒18的L1蛋白的病毒样颗粒以(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2)的比例混合。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)后，还包括纯化病毒样颗粒的步骤；较佳地，纯化方法包括：破碎菌体后，加入NP40搅拌混匀，之后加入PEG8000沉淀VLP，搅拌10-40小时，离心收集沉淀，PBS重溶、搅拌10-40小时，离心收集上清。

6.一种人乳头瘤病毒的四价疫苗组合物，其特征在于，该疫苗组合物包括以(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2):(0.5～2)的比例混合的人乳头瘤病毒6的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒11的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒16的L1蛋白的病毒样颗粒、人乳头瘤病毒18的L1蛋白的病毒样颗粒。

7.如权利要求6所述的人乳头瘤病毒的四价疫苗组合物，其特征在于，所述的人乳头瘤病毒的四价疫苗以权利要求1-5任一所述的方法制备获得。

8.如权利要求6所述的人乳头瘤病毒的四价疫苗组合物，其特征在于，所述的组合物还含有免疫佐剂，较佳地，所述的免疫佐剂是氢氧化铝佐剂。

9.权利要求6-8任一所述的人乳头瘤病毒的四价疫苗组合物的用途，用于制备抑制人乳头瘤病毒的药物或药盒。

10.一种用于抑制人乳头瘤病毒的药盒，其特征在于，所述药盒含有权利要求6-8任一所述的人乳头瘤病毒的四价疫苗组合物。