[发明专利]豚鼠补体C1q-B单克隆抗体60G4的制备与应用

说明书

本发明涉及一种豚鼠补体C1q‑B单克隆抗体60G4(60G4单抗)。60G4单抗是通过用大肠杆菌的工程菌重组表达豚鼠的补体C1q‑B，再以表达的C1q‑B免疫小鼠，将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选后获得了抗体分泌性能良好的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞分泌的60G4单抗对豚鼠补体C1q具有良好的亲和力。应用所述单克隆抗体60G4对豚鼠补体C1q‑B 60G4的检测技术及方法具有良好的特异性、敏感性、可操作性，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及以分子克隆手段表达的豚鼠补体C1q-B为免疫原免疫小鼠，获得杂交瘤细胞株60G4及其产生的单克隆抗体。60G4单抗与豚鼠补体C1q具有高度亲和力，可以应用于对豚鼠补体C1q的检测中，本发明主要对60G4单抗在补体结合酶联免疫吸附试验(CF-ELISA)中的应用进行了实例验证。本发明属生物制品领域。

技术背景

单克隆抗体技术是1975年英国科学家Mi l stein和Kohler所发明，并获得1984年诺贝尔医学奖。单克隆抗体具有高度的特异性，定向性。通过单克隆抗体可以获得高特异，准确定位的免疫学检测技术。本专利通过采用原核表达的豚鼠补体C1q-B免疫小鼠，取小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌抗豚鼠补体C1q-B单克隆抗体的杂交瘤细胞。从而获得可用于检测豚鼠补体C1q的单克隆抗体。

目前，豚鼠补体是补体结合类试验的关键试剂。补体结合类试验在免疫学检测中有广泛应用，包括传统的补体结合试验，新型CF-ELISA技术等。单克隆抗体具有高度的反应特异性，补体结合试验也被公认为是一种特异性较高的检测特异性抗原抗体反应的技术。本发明可将2者结合，有利于获得高特异性的检测结果。

发明内容

本发明的目的是提供一种高亲和力及高特异性的抗豚鼠补体C1q单克隆抗体，及其在免疫检测、补体结合实验方面的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株60G4已于2015年9月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为(CGMCC N0.11186)。

本发明还提供了一种高亲和力高特异性的结补体的C1q单克隆抗体60G4，由上述杂交瘤细胞株产生。

另外，上述本发明提供的单克隆抗体或所述杂交瘤细胞株在制备用于检测或辅助检测豚鼠补体C1q-B的免疫检测工具时的应用，也属于本发明的保护范围。其中，所述免疫检测工具具体为试剂、试剂盒、芯片或试纸。

上述本发明提供的单克隆抗体在制备用于检测豚鼠补体C1q-B的免疫检测产品中的应用、在制备用于诊断豚鼠补体C1q-B相关性的免疫疾病的产品中的应用、在制备检测或辅助检测布鲁氏菌病CF-ELISA的免疫检测工具中的应用，也属于本发明的保护范围。其中，所述免疫检测工具具体为试剂、试剂盒、芯片或试纸。

另外，本发明还保护一种布鲁氏菌病检测试剂盒，该试剂盒中含有前述本发明提供的单克隆抗体。

本发明以分子克隆手段表达了豚鼠补体C1q-B，免疫小鼠并融合骨髓瘤细胞后获得了能分泌豚鼠补体C1q单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为豚鼠补体C1q-B 60G4单克隆抗体。

本发明所述的单克隆抗体的制备方法如下：

1、豚鼠补体C1q-B基因的克隆、表达；根据豚鼠补体C1q-B基因序列(XM_003471337.3.)，设计一对引物，以cDNA为模板进行PCR扩增；上下游引物分别引入EcoR I和Xhol酶切位点，插入表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)plys sS感受态细胞，筛选提取阳性克隆菌pET-32a(+)-C1q-B-BL21，用0.1mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达，取诱导后菌液离心取沉淀进行超声，超声后沉淀即为超声豚鼠补体C1q-B；

其中，豚鼠补体C1q-B基因序列(XM_003471337.3.)的具体序列如下：