[发明专利]一种紫外荧光分子探针的合成及其对亚硝酸根的检测

权利要求书

1.一种紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺的合成方法，其步骤是：

将5-氨基吲哚置于250 mL圆底烧瓶中，将其溶于无水乙腈中，室温搅拌，氮气保护下，加入三乙胺及4-二甲氨基吡啶，将2,6-吡啶二甲酰氯溶于无水乙腈中，并将其滴入上述溶液中，立即有白烟生成，室温搅拌12小时，直到有固体析出，反应完成后将溶剂蒸除，固体用水洗涤，过滤后继续用无水乙腈洗涤三次，30℃真空干燥，得到紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺。

2.用权利要求1所合成的紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺对黄河水、湖水及自来水样中的亚硝酸根进行检测，其步骤是：

a．将紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺，溶于10 mM、pH=3的HEPES缓冲溶液中，用紫外吸收光谱和荧光发射光谱分别测定紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺的吸收和发射光谱，经测定，其紫外吸收最大波长为270 nm处，最强荧光发射在360 nm处；向其中加入亚硝酸根，放于37 ℃恒温水浴中孵化30分钟后，其紫外吸收最大波长仍处于270 nm处，同时在520 nm可见光区出现了一个新的吸收峰，导致了溶液颜色由无色变为粉色，因此，紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺可用于对亚硝酸根进行裸眼可视识别；加入亚硝酸根后，最强荧光发射仍处于360 nm处，同时荧光发生猝灭； 紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺可以在紫外-可见吸收和荧光发射两种模式下对亚硝酸根进行定量分析；

b．将紫外荧光分子探针N,N’-5-二吲哚-2,6-吡啶二甲酰胺，溶于10 mM、pH=3的HEPES缓冲溶液中，向溶液中加入浓度为0-100 μM的亚硝酸根，放于37 ℃恒温水浴中孵化30分钟后，溶液颜色由无色变为粉色，同时用紫外吸收光谱和荧光发射光谱检测，记录其在270 nm处的紫外吸收强度和360 nm处的荧光发射强度，根据亚硝酸根的浓度和紫外吸收光谱的强度建立标准曲线，其方程为y = 0.0687 + 0.552 × [NO₂^﹣], R = 0.994），检出限(LOD, S/N = 3)可以达到0.166 μM (σ = 0.00144)，同时，根据亚硝酸根的浓度和荧光发射光谱的强度建立标准曲线，其方程为y = -0.00124 + 0.0572 × [NO₂^-]， R=0.994），检出限(LOD, S/N = 3)可以达到0.10 μM (σ =0.428)。