[发明专利]一种细叶青蒌藤组培快繁的方法

说明书

一种细叶青蒌藤组培快繁的方法，包括以下步骤：外植体选取、外植体消毒、繁殖培养、复壮、生根和炼苗一体化培养、试管苗移栽。本发明是通过植物组培快繁技术繁育细叶青蒌藤种苗，可以不受季节、基质和穗条等因素影响，常年生产，且在较短时间内繁育出大量可供大田栽培的细叶青蒌藤种苗，显著提高了细叶青蒌藤繁殖系数和种苗质量，满足生产上的需要。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是指一种细叶青蒌藤组培快繁的方法。

背景技术

细叶青蒌藤[Piper kadsura(Choisy)Ohwi]为胡椒科植物，主产于我国福建、广东、海南、四川、云南和台湾等地，是我国常用大宗中药材，以根茎入药。细叶青蒌藤含有较多的挥发油，具有抗炎镇痛的药理活性，有祛风湿、通经络、止痹通的功效，用于风寒湿痹、肢节疼痛、经脉拘挛、屈伸不利，民间还广泛应用于药膳。

由于细叶青蒌藤具有良好的疗效，原料用量不断增加，市场供不应求。近年来，随着沙县小吃对细叶青蒌藤需求量不断增加，在经济利益的驱使下，药农枯竭性采挖野生资源，致使其处于濒危边缘。目前，细叶青蒌藤主要采用扦插繁殖，由于扦插繁殖受到季节、基质和穗条等因素影响，产量很不稳定，经常出现供不应求局面。鉴于细叶青蒌藤的良好疗效和药膳价值，为了更好地保护、开发和利用中药细叶青蒌藤资源，势必采用一种新的种苗快速繁殖途径。目前，尚未有公开过关于细叶青蒌藤的组培快繁方法。

发明内容

本发明提供一种细叶青蒌藤组培快繁的方法，其主要目的在于克服现有细叶青蒌藤产量不稳定，经常供不应求的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种细叶青蒌藤组培快繁的方法，包括以下步骤：

1)外植体选取：剪取半木质化的细叶青蒌藤藤条，于自来水下冲洗干净，之后将该藤条切成3～4cm的带一个节藤段；

2)外植体消毒：在无菌条件下用72～75%酒精消毒30～60秒，再用无菌水冲洗1～3次；之后用0.1%升汞消毒6～10分钟，再用无菌水冲洗3～5次，最后用无菌滤纸将表面的水分吸干备用；

3)繁殖培养：将消毒后的带一个节藤段切除掉与消毒液接触的两端0.5～1.0cm部分，并把剩下的藤段接种在诱导培养基上获得新苗；将新苗叶片去除，切割成1～3cm带节的藤段，并将其平铺在繁殖固体培养基上表面，然后将该藤段中的1/2～2/3部分植入该繁殖固体培养基内部，接种好后放置在培养室内培养55～65天；

所述繁殖固体培养基的配方为：1/3MS基本培养基，6-糠基氨基嘌呤（KT） 0.5～2.0mg/L ，吲哚丁酸（IBA）0.05～0.1mg/L，蔗糖30.0g/L，琼脂粉5.0g/L；

4)复壮、生根和炼苗一体化培养：培养室培养完后，将繁殖获得的大量带1～3个节的新苗剪下，接种到复壮、生根和炼苗一体化培养基中，在组培室培养12～18天，根原基刚出现即转入温室大棚进行复壮、生根和炼苗一体化培养25～35天，获得植株健壮、根系发达的试管苗；

所述复壮、生根和炼苗一体化培养基的配方为：1/3MS基本培养基，吲哚丁酸（IBA）0.1～0.5mg/L，蔗糖20.0g/L，琼脂粉5.0g/L，活性炭1.0g/L；

5)试管苗移栽：在温室大棚内形成健壮完整植株后，取出试管苗，洗去其根部残留的琼脂，并用70%甲基托布津药液浸泡10～15分钟，之后将该试管苗捞起并滤干药液，移栽到育苗大棚。

进一步的，所述诱导培养基的配方为：1/3MS基本培养基，6-糠基氨基嘌呤（KT）1.0mg/L，吲哚丁酸（IBA）0.05mg/L，蔗糖30.0g/L，琼脂粉5.0g/L。

进一步的，所述培养室的培养条件为：温度22～28℃，光照强度1500～2000lux，光照时间10小时/天。