[发明专利]一种刺参养殖用复合型合生元添加剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及复合芽孢杆菌-海洋活性寡糖合生元研制方法及其在刺参养殖中的应用。

背景技术

刺参是中国20多种可食用海参中品质最好的一种，位列海产八珍之首，具有极高的营养价值和经济价值。近十多年来，刺参养殖业发展迅猛，2013年全国刺参产量超过13×10⁴吨，产值突破300亿元，在水产养殖行业单种产值和利润中最高，其发展速度和综合经济效益都是其他经济水产品种所无法比拟的。随着刺参产业向高密度集约化方式转变，刺参养殖的健康和病害问题日益凸显，腐皮综合征等疾病频发，导致生产性能降低，严重制约了刺参产业健康和可持续发展。虽然使用抗生素和化学药物防治水生动物疾病具有一定的效果，但是会导致细菌出现抗药性、药物残留及破坏动物与环境中正常菌群平衡等诸多弊端。随着现代水产养殖业逐步向绿色、环保和无公害方向发展，益生菌和益生元等天然绿色饲料添加剂因具有利于肠道及水体微生态群系平衡、促进动物生长及增强免疫应答，可为宿主带来诸多益处，且绿色安全、无污染，逐渐成为水产养殖领域研究的焦点。

发明内容

本发明的目的在于高效科学配伍益生菌及益生元，从而显著提高刺参的生长性能及非特异性免疫应答，以保证刺参产业健康可持续性发展。

为了达到上述目的，本发明提供了一种海洋合生元添加剂，该添加剂包含源自海洋、具有生物活性的海洋寡糖类益生元——壳寡糖，以及能利用壳寡糖作为能源物质生长的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。所述三种芽孢杆菌与上述寡糖类益生元科学配伍，制备出的海洋合生元添加剂为可用于刺参养殖促进其生长及增强免疫力的复合型合生元添加剂；

上述海洋合生元添加剂的组成包括：

解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、海洋寡糖类益生元、菌体保护剂、矿物质载体；

所述海洋益生元壳寡糖的聚合度为2～10；

所述壳寡糖分子量<2000；

所述菌体保护剂为脱脂奶粉、甘油、蔗糖或明胶；优选脱脂奶粉；

所述矿物质载体为沸石粉。

优选方式下，所述海洋合生元添加剂各组分的配比为：

浓度分别大于等于1×10¹⁰CFU/mL的解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌菌液中加入占所述菌液质量5～8％的海洋寡糖类益生元壳寡糖、占所述菌液质量5～10％的菌体保护剂后得到的溶液与所述矿物质载体按体积质量比1:0.25ml/g混合，冻干。

进一步优化，解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌菌液浓度等于1×10¹⁰CFU/mL，加入的海洋寡糖类益生元占所述菌液质量5％、菌体保护剂占所述菌液质量的10％。

本发明所述三种芽孢杆菌均对刺参没有安全性风险，无致病性，可作为刺参的益生菌使用。

本发明还提供了上述海洋合生元添加剂的制备方法，具体步骤如下：

S1、取解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌菌液，加入海洋寡糖类益生元、菌体保护剂，得到混合液；

所述海洋寡糖类益生元为聚合度为2～10的壳寡糖；

所述壳寡糖分子量<2000；

所述菌体保护剂为脱脂奶粉、甘油、蔗糖或明胶；优选脱脂奶粉。

优选方式下，所述三种芽孢杆菌菌液浓度分别大于等于1×10¹⁰CFU/mL；优选等于1×10¹⁰CFU/mL；

加入的所述海洋寡糖类益生元的量占所述三种芽孢杆菌菌菌液质量的5～8％；优选5％；

加入的所述菌体保护剂的量占所述三种芽孢杆菌菌液质量的5～10％；优选10％。

所述三种芽孢杆菌菌液的制备方法优选为：

将上述三种芽孢杆菌分别进行发酵富集，培养温度为25～30℃，pH 6.8～7.8，培养48～72h，得到芽孢杆菌发酵液；分别调整芽孢杆菌发酵液浓度之后将三种芽孢杆菌发酵液混合制成混合菌液；

所述三种芽孢杆菌发酵培养基为改进后的2216E海洋培养基，具体成分质量体积比为：

蛋白胨:壳寡糖:酵母膏:沙滤海水＝0.3:0.1:0.1:100(g:g:g:g:ml)。

此步骤可采用平板计数法调整发酵后的三种芽孢杆菌发酵液浓度。

S2、将步骤S1制得的混合液与矿物质载体混合；