[发明专利]一种脂肪干细胞无血清培养基及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种脂肪干细胞无血清培养基，包括DMEM低糖培养基，还包括转铁蛋白、血清白蛋白、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、β‑巯基乙醇、二氢杨梅素和儿茶素。本发明属于干细胞培养技术领域，本发明提供的脂肪干细胞无血清培养基可显著提高脂肪干细胞的贴壁性能和增殖速率，利于脂肪干细胞的增殖和干细胞特性保持，培养基的成分较简单，成本较低。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种脂肪干细胞的无血清培养液及其制备方法和用途。

背景技术

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是zuk等人于2001年从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞。脂肪干细胞能够在体外稳定增殖，且来源丰富、取材方便、细胞获取量较大，适宜大规模培养，具有很高的临床应用价值，在细胞工程、组织工程及再生医学等领域得到广泛的应用。

脂肪干细胞的贴壁较缓慢，通常需要在培养基中添加动物血清或其他促进贴壁的生长因子，以促进脂肪干细胞的贴壁和增殖。动物血清中含有能为脂肪干细胞提供生长增殖所需的激素、生长因子、转移蛋白等营养物质，能促进脂肪干细胞的贴壁，但存在诸多缺点：价格昂贵，来源不稳定，批间差异较大，需要大量验证工作，成分不明确，不利于疫苗和单克隆抗体等目的产品的分离纯化，容易被病毒和支原体感染等。

无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，以满足干细胞的培养要求，同时避免因使用血清带来的诸多不利因素。血清替代成分较复杂，包括生长因子、蛋白等营养成分。已有研究表明，表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等生长因子，以及三七总皂甙、丹参酮ⅡA等中药成分能有效促进干细胞的增殖。与脂肪干细胞生物学行为相关的生长因子主要有血小板衍生生长因子、转化生长因子和血管内皮生长因子。无血清培养基是干细胞走向临床应用的重要条件，也是近年来的研究热点之一。

中国专利申请CN 103255103公开了一种无血清的脂肪干细胞培养基，该培养基在DMEM-LG培养基的基础上添加了碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、肝素、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇、白血病抑制因子和丙酮酸钠等组分，但未添加促进贴壁的细胞因子，需要使用包被的培养器皿以提高贴壁性能，且未添加白蛋白等营养成分，增殖较缓慢。

中国专利申请CN 104877962公开了一种无血清的脂肪干细胞培养基，该培养基在IMDM培养基的基础上，还包括重组人胰岛素、重组转铁蛋白、维生素C、人血清白蛋白、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子、纤维连接蛋白、胎球蛋白、茶多酚和干细胞生长因子，通过纤维连结蛋白和胎球蛋白的协同作用，大大增强了脂肪干细胞的贴壁性能，无需对培养器皿进行包被，但成分较复杂。

目前已有一些市售脂肪干细胞无血清培养基，如Gibco、佰通生物科技等公司的脂肪干细胞无血清培养基，但存在价格昂贵、贴壁性能不够理想等缺点，贴壁性能不佳会对脂肪干细胞的增殖、分化等一系列反应产生影响。因此，提供一种成分较简单、贴壁性能优良的无血清培养基以促进脂肪干细胞的增殖具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种脂肪干细胞无血清培养基，通过添加少量的二氢杨梅素和儿茶素，可显著提高脂肪干细胞的贴壁性能和增殖速率，利于脂肪干细胞的增殖和干细胞特性保持，培养基的成分较简单，成本较低。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。

本发明提供一种脂肪干细胞无血清培养基，包括DMEM低糖培养基，还包括转铁蛋白、血清白蛋白、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、β-巯基乙醇、二氢杨梅素和儿茶素。