[发明专利]一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明提出了一种新型的具有肿瘤细胞靶向的给药系统的制备方法即一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

白蛋白(Albumin，Alb)由肝实质细胞合成，在血浆中的半衰期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40％-60％。白蛋白的分子结构已于1975年阐明，为含585个氨基酸残基的单链多肽，分子量为66458，分子中含17个二硫键，不含有糖的组分。在体液pH7.4的环境中，白蛋白为负离子，每分子可以带有200个以上负电荷。它是血浆中很重要的载体，许多水溶性差的物质可以通过与白蛋白的结合而被运输,这些物质包括胆红素、长链脂肪酸(每分子可以结合4-6个分子)、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子(如Cu²⁺、Ni²⁺、Ca²⁺)、药物(如阿司匹林、青霉素等)。具有活性的激素或药物当与白蛋白结合时，可以不表现其活性，而视为其储存形式，由于这种结合的可逆性和处于动态平衡，因此在调节这些激素和药物的代谢上，具有重要意义。

目前作为载体材料使用的白蛋白包括人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)和牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA)。牛血清白蛋白(BSA)，又称第Ⅴ组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66000，等电点为4.7。其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽键的34位是一个游离巯基。白蛋白在pH4-9范围内保持稳定，在60℃加热10h而没有变化，具有良好的稳定性。在BSA的三个结构域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ中，结构域Ⅱ和Ⅲ均有一个由疏水性及荷正电的基团所构成的袋装结构，其中能够容纳多种结构的化合物。由于BSA与HSA不仅结构相似，而且两者的氨基酸序列高度相似，且不同氨基酸均为保守性替换，而BSA更价廉易得，因此被广泛应用于医药研究领域中。

近年来越来越多事实表明，仅仅发展新药不足以保证药物治疗的进步，发展合适的药物载体系统可以克服目前存在的一些问题，还可能实现药物控释和定点释药。因此，微球、微乳、纳米粒、脂质体等亚微粒药物载体输送系统研究成为药物新剂型研究中非常活跃的领域，同时研究工作者在选择性吸收和靶向给药等方面取得了显著的成就。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布、调节释药速度、提高生物利用度、增加药物对生物膜的透过性、增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。在以上给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性等优点，但一般脂质体也存在体内外不稳定、药物易于渗漏等问题。含药微乳由于其物理稳定性、油相对药物的溶解度等问题限制了其进一步发展。聚合物纳米粒在制备过程中可能带来潜在毒性的物质，如残留单体、有机溶剂、聚合物引发剂等，所用的生物降解性高分子材料在细胞吞噬降解后也常产生细胞毒性。因此人们将目光逐渐转向由生物相容、体内降解的天然脂质材料作为载体的脂质纳米粒。

1990初开发的脂质纳米粒(LNP,lipid nanoparticles)是一种可替代乳剂、脂质体和聚合物纳米粒的新型给药系统。LNP系统既具备聚合物纳米粒物理稳定性高、药物泄漏慢的优势，又兼具了脂质体、乳剂的毒性低、能大规模生产的优点，是一种极有发展前景的新型给药系统。LNP是由具有生理相容性并可生物降解的，由拥有良好人体使用历史的脂质制备而成，具有下述优点：(1)纳米粒粒径小，平均粒径在纳米级，微米级颗粒含量极少，可用于注射给药(当颗粒径>5μm时，不宜用于注射给药)；(2)生理可接受，载体无生物毒性，制备过程中不使用有毒聚合物、单体等有毒残留物；(3)对亲脂性药物有足够的载药能力，相对脂质体载药量提高，通过工艺调整，也可以包封亲水性药物；(4)药物释放可以达到缓释、控释目的；(5)其水分散系统可以进行高压灭菌或γ辐射灭菌，具有长期的物理化学稳定性，也可将之冻干或喷雾干燥制成固体粉末；(6)通过对其表面进行特征修饰可控制靶向特定组织(靶向给药)；(7)有足以供应市场的大规模工业化生产方式；(8)价格相对较为低廉。因此，近期LNP吸引了人们越来越多的注意。

近年来越来越多事实表明，仅仅发展新药不足以保证药物治疗的进步，需要发展合适的药物靶向肿瘤载体系统可以克服目前存在的一些问题，实现药物肿瘤靶向释药。

发明内容