[发明专利]一种诱导杨树不定芽染色体加倍的方法

权利要求书

1.一种诱导杨树不定芽染色体加倍的方法，其特征是，包括如下顺序进行的步骤：

1）将杨树无菌苗叶片剪切成无菌叶片块；

2）将叶片块接种到叶片分化再生培养基中，进行愈伤组织分化培养，形成愈伤组织，在愈伤组织分化培养过程中，采用显微镜或放大镜观察离体外植体切口处愈伤组织的发育状态；

3）在显微镜或放大镜观察离体叶片块切口处愈伤组织发育到第Ⅱ阶段，离体叶片切口处形成的愈伤组织宽度>0mm，且≤1mm的阶段时，将进行了愈伤组织分化培养后的离体叶片接种于液体分化再生培养基中，进行愈伤组织的秋水仙碱诱导培养，其中所述液体分化再生培养基为MS基本培养基+NAA 0.05 mg/L+6-BA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+秋水仙碱30 -40mg/L；

4）将秋水仙碱诱导培养2-4天后，将离体叶片取出并接种于不定芽再生培养基中，不定芽从叶片愈伤中再生；

5）将不定芽接种于生根培养基中，进行诱导生根培养，获得杨树再生植株。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1）中所述无菌叶片块是将无菌苗叶片垂直于叶片主脉剪切而成。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征是，步骤2）中所述叶片分化再生培养基为MS基本培养基+3%蔗糖+0.6% 琼脂+0.4 mg/ L 6-BA+0.05 mg/ L NAA。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征是，步骤4）中所述不定芽再生培养基为MS基本培养基+NAA 0.05 mg/L+6-BA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征是，步骤5）中所述生根培养基为1/2MS基本培养基+IBA 0.5mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L。