[发明专利]一种高生长能力隐甲藻突变藻株的选育方法

权利要求书

1.一种隐甲藻藻株人工选育的方法，其特征在于：包括隐甲藻藻株常压室温等离子体诱变和在脂肪酸合成关键酶乙酰辅酶A羧化酶的抑制剂稀禾定的选择压力下对藻株进行筛选，具体操作包括：

（1）利用常压室温等离子体诱变对隐甲藻藻株进行诱变：使用室温常压等离子体诱变仪对隐甲藻藻液进行诱变；

（2）将诱变处理后的隐甲藻藻液涂布于固体C9N2培养基上，在正常培养条件下进行培养，同时以未诱变处理的藻液作为对照；

（3）待藻落长出后，每块有效平板挑取较大菌落，再次保存至新的C9N2培养基固体平板上；

（4）将单菌落挑入液体C9N2培养基中培养；

（5）将隐甲藻诱变株藻液涂布于含有稀禾定的固体C9N2培养基上，正常培养条件下进行培养，同时以未诱变处理的藻液作为对照。根据平板上的藻落长出情况，挑选存活的藻落，即可得到高生物量的隐甲藻突变株；

（6）隐甲藻突变株的生长特性分析：将所得的隐甲藻突变株在C9N2的液体培养基中培养，鉴定突变株最大生物量是否高于原始出发藻株；

所述诱变处理的隐甲藻细胞浓度为10⁶～10⁸ 个/mL，藻液内添加5%～20%甘油，等离子体发射源与样品之间距离为2 mm，处理功率为100 W，气流量为10 SLM，诱变处理时间为0～100 s，诱变过程中稀释细胞，洗脱载片上藻株均使用液体C9N2培养基；

其中所述固体C9N2培养基是由葡萄糖9 g，酵母浸粉2 g，海盐25 g，琼脂15 g，加水至1L而成，pH为6.5；所述液体C9N2培养基是由葡萄糖9 g，酵母浸粉2 g，海盐25 g，加水至1 L而成，pH为6.5

（7）步骤（5）和步骤（6）稀禾定的使用浓度为5 μmol/L～500 μmol/L；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）和步骤（6）液体培养基中培养时，摇床参数设置为转速20～200 rpm，温度4～40°C；

3.一种隐甲藻藻株人工驯化的方法，其特征在于在乙酰辅酶A羧化酶的稀禾定抑制剂选择压力下，对隐甲藻藻株进行驯化的方法，具体操作包括：

（1）将隐甲藻藻液涂布于含有不同浓度稀禾定的固体C9N2培养基上，正常条件下进行培养，同时以未加稀禾定的固体平板作为对照。根据平板上的藻落长出情况，确定稀禾定的最初适宜抑制浓度；

（2）将隐甲藻接种到含有适宜浓度稀禾定的液体C9N2培养基中，正常条件下培养；

（3）当隐甲藻细胞数量达到10⁷～10⁸ 个/mL时，进行传代；

（4）待隐甲藻能够在含某一浓度稀禾定培养基内正常生长时，适当提高稀禾定浓度继续培养；直至经过多次传代的藻株通过表性分析，其生长的最高生物量明显高于原始出发藻株；

其中所述固体C9N2培养基是由葡萄糖9 g，酵母浸粉2 g，海盐25 g，琼脂15 g，加水至1L而成, pH为6.5；

所述液体C9N2培养基是由葡萄糖9 g，酵母浸粉2 g，海盐25 g，加水至1 L而成, pH为6.5；

（5）步骤（1）和步骤（4）稀禾定的使用浓度为5 μmol/L～500 μmol/L。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（4）液体培养基中培养时，摇床参数设置为转速20～200 rpm，温度4～40°C。