[发明专利]基于EXCELVBA的生物群落代谢多样性数据分析方法

权利要求书

1.基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：基于EXCELVBA的数据分析方法具体过程为：

步骤一、称取相当于10g烘干土壤的新鲜土壤样品悬浮于90ml磷酸缓冲液中并稀释至10^-3，将上清液接种至Biolog Eco微孔板上，在25℃培养箱中培养10天；

步骤二、培养4～6h后，使用酶标仪或Biolog自动微生物鉴定系统第一次读取590nm和750nm波长下Biolog Eco微孔板每个微孔中的吸光度值，此后每24h读取一次数据，连续10天读取数据，将10天读取的数据分别保存在一个时间命名为.xls文件中；

步骤三、将每天读取的数据导入Excel表格模板中，在Excel表格模板中将Biolog Eco微孔板根据底物不同进行分类，将每个微孔每次读取的590nm吸光度值减去750nm吸光度值作为该微孔在该时刻的最终吸光度值；

步骤四、根据吸光度值计算每次测定Biolog Eco微孔板每个微孔颜色平均变化率AWCD；

根据AWCD值绘制AWCD值随培养时间变化的曲线，选取曲线区域平衡时的AWCD值进行多样性指数的计算。

2.根据权利要求1所述基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：所述Excel表格模板的具体执行过程为：

1)、打开Excel，进入A-BEP-DSAS界面；A-BEP-DSAS界面为Excel数据处理模板界面；

2)、单击A-BEP-DSAS界面中的Analysis，弹出数据分析窗口；

3)、在数据分析窗口中点击DataInput按钮，将连续10天测定的590nm及750nm吸光度值数据导入A-BEP-DSAS的Original Data sheet单元格内；

4)、在数据分析窗口的Sample ID及Sample Date窗口输入590nm和750nm波长下Biolog Eco微孔板每个微孔中的吸光度值，及590nm和750nm波长下Biolog Eco微孔板每个微孔中的吸光度值采集时间或数据分析时间；

5)、根据使用者处理数据的要求选择采用OD590nm或OD590nm-OD750nm数据进行多样性指数的计算，如果采用OD590nm，则选择No，如果采用OD590nm-OD750nm，则选择Yes；

6)、根据使用者处理数据的要求选择对某时间点数据进行分析；

7)、点击Analysis对数据进行分析处理，计算多样性指数，并统计各种碳源的利用情况；

8)、完成数据分析后，点击DataOutput将分析结果输入Summary Statement表格中对应的各列中；

9)、完成数据分析后点击Exit，退出Excel表格数据处理系统；

所述Analysis为分析；DataInput按钮为数据输入按钮；Original Data sheet为原始数据表；Sample ID为样品编号；Sample Date为样品编号；DataOutput为数据输出；Summary Statement表格为Excel总表；Exit为退出。

3.根据权利要求2所述基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：所述步骤一中Biolog Eco微孔板含有96个微孔，除三个对照孔外，其余的孔均装有不同的单一碳底物。

4.根据权利要求3所述基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：所述步骤四中根据吸光度值计算每次测定Biolog Eco微孔板每个微孔颜色平均变化率AWCD；

AWCD＝∑(C_i－R)/31

式中：C_i为第i孔吸光度值；R为对照孔吸光度值，31为96孔Biolog Eco微孔板中的31种底物。

5.根据权利要求4所述基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：所述步骤四中多样性指数包括Shannon指数H、Simpson指数D、McIntosh指数U、McIntosh Evenness指数、Pielou指数和Richness指数。

6.根据权利要求5所述基于EXCEL VBA的生物群落代谢多样性数据分析方法，其特征在于：所述Shannon指数H、Simpson指数D、McIntosh指数U、McIntosh Evenness指数、Pielou指数和Richness指数具体公式为：

Shannon指数H为：

H＝-∑P_ilnP_i

P_i＝(C_i－R)/∑(C_i－R)；

Shannon指数为物种多样数指数；

式中：P_i为第i孔的相对吸光值与整个平板相对吸光值总和的比率；

Simpson指数D为：

D＝1-∑Pi²

P_i＝(C_i－R)/∑(C_i－R)

Simpson指数为辛普森指数；

式中：P_i为第i孔的相对吸光值与整个平板相对吸光值总和的比率；

McIntosh指数U为：

U＝(∑n_i²)^1/2

式中：n_i为第i孔的相对吸光值；

McIntosh Evenness指数E为：

E＝(N-U)/(N-N/S^1/2)

N＝∑n_i

McIntosh Evenness指数为McIntosh均匀度指数；S为吸光度；

Pielou指数为：

EH＝H/lnS；

Richness指数S为：

S≥0.2

Richness Index为丰富度指数；S为吸光度。