[发明专利]单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用

说明书

本发明公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用。本发明首先公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明所述口蹄疫病毒血清型共享性表位是七个血清型口蹄疫病毒的共享型表位。本发明利用筛选得到的与单克隆抗体3D9特异性结合的噬菌体克隆作为模拟抗原建立的间接ELISA方法，能够特异性的检测出口蹄疫病毒阳性血清。本发明所述单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位在口蹄疫的诊断或防治中具有应用价值。

技术领域

本发明涉及口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位，本发明还涉及所述口蹄疫病毒血清型共享性表位在口蹄疫诊断或防治中的应用，属于口蹄疫的防治领域。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus,FMDV)引起的，严重危害偶蹄动物的重要传染病之一。该病引起幼畜死亡、产奶量下降、肉食减少、肉品下降、动物的生产性能降低，而且具有极强的传染性，可形成大范围流行，造成巨大的经济损失。预防和控制口蹄疫的关键是免疫接种和准确的诊断方法的应用。

口蹄疫病毒(FMDV)属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，为单股正链RNA，其基因组RNA全长约8.5kb。根据免疫原性，口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asial共7个血清型及65个以上的亚型，各血清型之间无交叉免疫保护。目前中国主要流行O型、A型和Asial型FMD。口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂，不同血清型、基因型和分离株的抗原位点和抗原表位都不尽相同，存在广泛的抗原变异。利用单抗逃逸突变株序列分析和交叉中和试验，已鉴定了一些不同血清型FMDV的抗原位点，相关的研究主要来自O、A、C和Asia1型FMDV，而某些相对保守的免疫显性表位可诱导机体产生血清型共享型单抗，对于FMDV感染的诊断具有重要价值。因此，研究口蹄疫病毒共享型单克隆抗体以及鉴定该单克隆抗体所识别的口蹄疫病毒血清共享型表位，对于口蹄疫的诊断和防治等均具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位；

本发明所要解决的第二个技术问题是将上述口蹄疫病毒血清型共享性表位应用于口蹄疫的诊断或防治。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了一株分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系以及由所述杂交瘤细胞系分泌的口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9。

本发明将分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系提交专利认可的机构进行保藏，其微生物保藏编号为：CGMCC No.13293；分类命名为：分泌FMDV共享型单克隆抗体的杂交瘤细胞株。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间是2016年11月25日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

经IFA特异性鉴定表明，由所述杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体3D9为一株血清型共享性单抗，其与O型、A型和Asia1型口蹄疫病毒抗原均有反应。

本发明以单克隆抗体3D9作为固相筛选分子，生物淘选噬菌体随机12肽库，经3轮淘选后，特异性噬菌体得到富集。随机挑取40个噬菌体，通过噬菌体ELISA和抗原竞争抑制试验，发现有7个噬菌体克隆可与单抗3D9特异性结合。提取阳性噬菌体克隆的DNA进行测序，发现阳性噬菌体克隆展示一个共有基序GVYxxAYxW(SEQ ID NO：1)；其中，X为任意一种氨基酸残基。该共有基序与所有7个血清型FMDV毒株VP2蛋白的第89-105氨基酸区域具有较高的相似性。