[发明专利]耐热萝卜EST-SSR分子标记、分子标记的引物及其应用

说明书

本发明提供了耐热萝卜EST‑SSR分子标记，包括SSR17和SSR75一种或两种；所述SSR17的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；所述SSR75的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。本发明通过对耐热萝卜品种‑‑夏抗40天筛选得到2个EST‑SSR分子标记，并且所述SSR17和SSR75具有共显性表达特性，利用具有共显性关系的2个EST‑SSR分子标记对商品种耐热萝卜品种‑‑夏抗40天的群体纯度进行检测，结果显示其纯度高达92％，同田间表型一致，因此，所述2个EST‑SSR分子标记能够用于耐热萝卜品种的纯度检测。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及耐热萝卜EST-SSR分子标记、分子标记的引物及其应用。

背景技术

分子标记(MolecularMarkers)，是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记--形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比，DNA分子标记具有标记的数量不限，能分析不同生物发育阶段的物种，且不影响目标性状的表达，因此，DNA分子标记较其他方法具有优越性。

DNA分子标记常用的标记方法包括RFLP分子标记、RAPD分子标记和SSR(SimpleSequence Repeats)分子标记。SSR分子标记是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)，是一类由几个核苷酸(一般为1～6个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。由于每个SSR两侧的序列一般是相对保守的单拷贝序列。由于微卫星可在多个等位基因间显示差异，因而在作物的遗传图谱构建，遗传多样性发析，亲缘关系鉴定，DNA指纹图谱构建，品种鉴定，QTL分析及分子辅助育种中均具有公认的优越性及应用前景。从品种间具广泛位点变异的角度考虑，SSR分子标记比RFLP及RAPD分子标记更具多态性，尤其对花生、六倍体小麦等用常见分子标记技术检测不出很多DNA片段多态性的作物品种来说，具有更大的研究价值和应用前景。

萝卜是我国重要的蔬菜作物，但分子生物学等基础研究相对比较落后，远不能满足育种或其他领域研究的需求，同时，萝卜种质资源丰富，但是栽培品种表型相似性高，遗传背景狭窄，例如，崔娜等人报道了75份萝卜材料的平均等位基因数、平均有效等位基因数以及基因多样性指数的数值都不高，具体地来自韩国白萝卜品种晨晓和雪凤凰等15对萝卜品种之间的相似系数为1.00，表明它们可能具有相同的遗传背景。鉴于此，萝卜不同品种之间区分较为困难，目前尚没有一种有效的SSR分子标记能够区分耐热萝卜品种的纯度。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种耐热萝卜EST-SSR分子标记、分子标记的引物及其应用，本发明提供的分子标记具有共显性，能够有效区分出耐热萝卜品种，并能进一步对耐热型萝卜品种的纯度进行鉴定。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

耐热萝卜EST-SSR分子标记，包括SSR17和SSR75一种或两种；

所述SSR17的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；

所述SSR75的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了耐热萝卜EST-SSR分子标记的引物，包括SSR17的正向扩增引物和反向扩增引物，以及SSR75的正向扩增引物和反向扩增引物中的一组或两组；

所述SSR17的正向扩增引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示；SSR17的反向扩增引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示；

所述SSR75的正向扩增引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5所示；SSR75的反向扩增引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.6所示。