[发明专利]流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法

权利要求书

1.流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征是包括以下内容：SYBR Green I对E.coli O157:H7进行染色；流式细胞术检测E.coli O157:H7；通过B细胞捕获不同浓度E.coli O157:H7所呈现的荧光强度，最终获得待测样品中细菌浓度。

2.根据权利要求1所述的流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征是该方法依次包括以下步骤：

1)、在1mL待检样品中，加入2μL SybrGreen I原液，在室温条件下避光孵育20±2min；

2)、对步骤1)所得样品进行离心洗涤；

3)、取50μL步骤2)的所得物，加入至450μL 3.8×10⁵cells/mL的B细胞无酚红培养液中；

4)、将步骤3)所得物混匀后，以1400±100rpm的速度离心5±0.5min，弃掉上清，用400μL HBSS重悬沉淀后，用流式细胞仪进行检测；

5)、将步骤4)检测所得的SybrGreen荧光强度作为Y值，代入回归方程Y＝26.74+74.36/(1+10^(6.011-X)*0.9185)中，所得的X为液态待测样品中大肠杆菌的细菌浓度。

3.根据权利要求2所述的流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征是：回归方程的检测限范围为4.9×10⁴CFU/mL至4.9×10⁸CFU/mL。

4.根据权利要求2或3所述的流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征是：所述步骤2)中：以8000±100rpm的速度离心5±0.5min，弃掉上清后，用1mL的HBSS缓冲液重悬沉淀后进行重复洗涤，重复洗涤的次数为2～4次。

5.根据权利要求2或3所述的流式细胞术快速检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征是：所述流式细胞仪为FACSCalibur^TM(BD Biosciences,San Jose,CA,USA)。