[发明专利]在异养型微生物中制备特制油

权利要求书

1.一种原藻属细胞，包含外源基因。

2.如权利要求1所述的细胞，其中所述外源基因是编码序列并且可操作连接启动子。

3.如权利要求2所述的细胞，其中所述启动子来自与所述原藻属物质内源的基因。

4.如权利要求2所述的细胞，其中所述编码序列编码选自下列的蛋白：蔗糖转化酶、脂肪酰基-ACP硫酯酶、脂肪酰基-CoA/醛还原酶、脂肪酰基-CoA还原酶、脂肪醛还原酶、脂肪醛脱羰基酶、酰基载体蛋白和赋予抗生素抗性的蛋白。

5.如权利要求4所述的细胞，其中所述蛋白是对链长度为C8、C10、C12或者C14的一种或者多种脂肪酰基-ACP底物具有水解活性的脂肪酰基-ACP硫酯酶。

6.如权利要求5所述的细胞，其中所述酰基-ACP硫酯酶与选自SEQ ID NO:59,61,63和138-140的一种或多种序列具有至少50％的氨基酸一致性。

7.如权利要求5所述的细胞，其中所述编码序列包含来源于微藻的质体靶向序列。

8.如权利要求7所述的细胞，其中所述质体靶向序列来自所述原藻属物质。

9.权利要求7所述的细胞，其中所述质体靶向序列与SEQ ID NO:127-133中一个或者多个序列具有至少25％氨基酸序列一致性，并且能够使蛋白靶向质体，所述蛋白由未位于所述质体基因组中的外源基因编码。

10.如权利要求2所述的细胞，其中所述启动子在胞外环境从含有至少5mM氮变为不含氮时在所述原藻属细胞中上调至少3倍。

11.如权利要求10所述的细胞，其中所述启动子包含SEQ ID NO:91-102中一种序列的50个或者更多核苷酸的片段。

12.如权利要求1所述的细胞，其中所述外源基因整合到所述细胞的染色体中。

13.如权利要求1所述的细胞，其中所述细胞具有23S rRNA序列，所述23S rRNA序列与SEQ ID NO:11-19中的一种或多种具有至少75％核苷酸一致性。

14.如权利要求1所述的细胞，其中所述细胞是Prototheca moriformis,Prototheca krugani,Prototheca stagnora或Prototheca zopfii。

15.一种原藻属细胞，包含外源脂肪酰基-ACP硫酯酶基因，并且具有至少4％C8-C14的脂质特性。

16.如权利要求15所述的细胞，其中C8的量是至少0.3％。

17.如权利要求15所述的细胞，其中C10的量是至少2％。

18.如权利要求15所述的细胞，其中C12的量是至少2％。

19.如权利要求15所述的细胞，其中C14的量是至少4％。

20.如权利要求15所述的细胞，其中C8-C14的量是至少30％。

21.如权利要求15所述的细胞，进一步包含外源蔗糖转化酶基因。

22.如权利要求15所述的细胞，其中所述细胞具有23S rRNA序列，所述23S rRNA序列与SEQ ID NO:11-19中的一种或多种具有至少75％核苷酸一致性。

23.如权利要求15所述的细胞，其中所述细胞是Prototheca moriformis,Prototheca krugani,Prototheca stagnora或Prototheca zopfii。

24.如权利要求15所述的细胞，其中所述外源脂肪酰基-ACP硫酯酶基因整合到所述细胞的染色体中。

25.一种制备至少4％C8-C14的甘油三酯组合物的方法，包括培养权利要求15所述的细胞。

26.如权利要求25所述的方法，其中C8的量是至少0.3％。

27.如权利要求25所述的方法，其中C10的量是至少2％。

28.如权利要求25所述的方法，其中C12的量是至少2％。