[发明专利]直立百部愈伤组织高效诱导成苗的方法

权利要求书

1.一种直立百部愈伤组织高效诱导成苗的方法，其特征在于：以直立百部嫩芽作外植体，置于MS初代诱导培养基中进行诱导得到无菌试管苗，将试管苗置于MS愈伤诱导培养基中进行愈伤组织培养，所得愈伤组织置于MS分化培养基中得到大量丛芽，将丛芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养，得到的健壮植株置于MS生根培养基进行生根培养；所述MS初代诱导培养基以MS基本培养基为基础，添加1.0～2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.2～1.0mg/L吲哚乙酸、0.1～0.5mg/L激动素、30mg/L蔗糖、5mg/L琼脂，培养基的pH为5.8；

所述MS愈伤诱导培养基以MS基本培养基为基础，添加0.5～1.5mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、0.1～0.5mg/L激动素、30mg/L蔗糖、5mg/L琼脂，培养基的pH为5.8；

所述MS分化培养基以MS基本培养基为基础，添加1.0～3.0mg/L玉米素、0.1～0.5mg/L吲哚丁酸、0.10～0.50mg/L激动素、30mg/L蔗糖、5mg/L琼脂，培养基的pH为5.8；所述MS壮苗培养基以MS基本培养基为基础，添加1.0～2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.2～0.5mg/L萘乙酸、30mg/L蔗糖、5mg/L琼脂，培养基的pH为5.8；

所述MS生根培养基以1/2MS基本培养基为基础，添加0.2～1.0mg/L萘乙酸、10g/L蔗糖、5g/L琼脂，1.5g/L活性炭，培养基的pH为5.8。

2.根据权利要求1所述的直立百部愈伤组织高效诱导成苗的方法，其特征在于按以下步骤操作进行：

(1)外植体的选择与消毒

取直立百部的嫩芽作外植体，依次用体积浓度2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体；

(2)初代诱导培养获得无菌试管苗

将步骤(1)得的外植体接种到MS初代诱导培养基中，在温度为22～26摄氏度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗；

(3)愈伤组织诱导培养

将步骤(2)得到的无菌试管苗剪切成1cm茎段，置于MS愈伤诱导培养基中，在温度为22～26摄氏度，黑暗条件下培养30天，获得愈伤组织；

(4)愈伤组织分化培养

将步骤(3)得到的愈伤组织置于MS分化培养基中，在温度为22～26摄氏度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到大量丛生芽；

(5)壮苗培养

将步骤(4)得到的丛生芽切割成单个芽，置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26摄氏度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株；

(6)生根培养

将步骤(5)得到的健壮植株置于MS生根培养基培养，在温度为22～26摄氏度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株；

(7)炼苗与移栽

组培瓶中加入自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。