[发明专利]蛋白核小球藻荧光测雾霾生物毒性的藻液制备方法及应用

说明书

蛋白核小球藻荧光测雾霾生物毒性的藻液制备方法，属于蛋白核小球藻的技术领域，包括藻种的培养和藻液的制备，具体包括以下步骤：A、选取蛋白核小球藻藻种，于无菌条件下将藻种接种至装有液体培养基的锥形瓶中，接种完成，置于恒温光照培养箱中培养至对数期，备用；B、将培养至对数期得到的藻液经暗置后，用水样叶绿素荧光仪测定藻液叶绿素荧光动力学参数；C、根据步骤B测定的藻液叶绿素荧光动力学参数，选择细胞密度范围在(1‑1.2)×10⁶ind/·ml^‑1对数期蛋白核小球藻藻液，即可用于雾霾生物毒性测定。本发明还提供了该蛋白核小球藻藻液于雾霾生物毒性的测定，本发明方法简单，易操作，可以直观的反应雾霾的生物毒性。

技术领域

本发明属于蛋白核小球藻的技术领域，涉及蛋白核小球藻藻液的制备，具体涉及测定雾霾生物毒性用的蛋白核小球藻藻液的制备方法及应用。本发明蛋白核小球藻藻液的制备方法简单，易操作，制备的蛋白核小球藻藻液用于测定雾霾生物毒性灵敏度高、反映直观。

背景技术

雾霾是雾和霾的混合物，早晚湿度大时，雾的成分多，白天湿度小时，霾占据主力，相对湿度在80％到90％之间。其中雾是自然天气现象，空气中水汽氤氲，虽然以灰尘作为凝结核，但总体无毒无害；霾的核心物质是悬浮在空气中的烟、灰尘、重金属颗粒物等物质，空气相对湿度低于80％，颜色发黄，气体能直接进入并粘附在人体下呼吸道和肺叶中，对人体健康有伤害。雾霾天气的形成是主要是人为的环境污染，再加上气温低、风小等自然条件导致污染物不易扩散。雾霾形成有三个要素：一是生成颗粒性扬尘的物理基源。我国有世界上最大的黄土高原地区，其土壤质地最易生成颗粒性扬尘微粒。二是运动差造成扬尘。例如，道路中间花圃和街道马路牙子的泥土下雨或泼水后若有泥浆流到路上，一小时干涸后，被车轮一旋就会造成大量扬尘，即使这些颗粒性物质落回地面，也会因汽车不断驶过，被再次甩到城市上空。三是扬尘基源和运动差过程集聚在一定空间范围内，颗粒最终与水分子结核集聚成霾。

大范围雾霾天气主要出现在冷空气较弱和水汽条件较好的大尺度大气环流形势下，近地面低空为静风或微风。由于雾霾天气的湿度较高，水汽较大，雾滴提供了吸附和反应场所加速反应性气态污染物向液态颗粒物成分的转化，同时颗粒物也容易作为凝结核加速雾霾的生成，两者相互作用，迅速形成污染。现有雾霾的检测手段主要是采样分析，可以用色谱法分析，但是操作复杂，只能分析出各类成分，然后根据成分评判毒性；或空气质量指数，参与空气质量评价的主要污染物为细颗粒物、可吸入颗粒物、二氧化硫、二氧化氮、臭氧、一氧化碳等六项，PM2.5颗粒物的检测，用质量浓度来表示，不能直观反映其在生物体上的综合毒性表现。因此需要一种直观反映雾霾毒性的方案及其毒性的测定方案。

发明内容

本发明为解决现有技术中不能直观的反应雾霾在生物体上的毒性表现，提供了一种测定雾霾生物毒性用的蛋白核小球藻藻液的制备方法及应用，可以全面了解雾霾的毒性效应，而且能更深入的了解污染物的毒理作用机制与途径，更能体现实际环境中雾霾暴露的现象和信息。

本发明为实现其目的采用的技术方案是：

蛋白核小球藻荧光测雾霾生物毒性的藻液制备方法，包括藻种的培养和藻液的制备，具体包括以下步骤；

A、蛋白核小球藻的培养：选取蛋白核小球藻藻种，于无菌条件下将藻种接种至装有液体培养基的锥形瓶中，接种完成，置于恒温光照培养箱中培养至对数期，备用；

B、蛋白核小球藻叶绿素荧光参数的确定：将培养至对数期得到的藻液经暗置10-15min后，用水样叶绿素荧光仪测定藻液叶绿素荧光动力学参数，绘制叶绿素荧光诱导曲线，所述动力学参数包括PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)、PSⅡ实际光能转化效率(Y(Ⅱ))、光合电子传递效率(ETR)、光化学淬灭(qP)、非光化学淬灭(NPQ)；