[发明专利]一种双膦酸类药物的检测方法

权利要求书

1.一种双膦酸类药物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

对含双膦酸类药物的待测样品进行预处理，得到预处理后的样品溶液；

采用液相色谱-串联质谱法对所述样品溶液进行检测，得到待测样品中双膦酸类药物的含量，其中，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件包括：采用五氟苯基柱作为色谱柱，流动相由A相和B相组成，A相为甲酸和甲酸铵的混合水溶液，B相为甲醇。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述A相中，甲酸的体积分数为0.1～0.5％，甲酸铵的浓度为5～20mM。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述五氟苯基柱的柱内径为1～3mm，柱长为50～150mm，填料粒径为1～5μm。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序如下：0～0.5min，A相与B相的体积比为95/5；0.5～1.5min，A相与B相的体积比由95/5线性地变为50/50；1.5～2.5min，保持A相与B相的体积比为50/50；2.5～2.6min，A相与B相的体积比由50/50线性地变回95/5；之后以A相与B相的体积比为95/5保持5min。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.2～0.4mL/min。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件还包括：进样量为5～20μL。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为20～40℃。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱法的质谱条件包括：采用电喷雾离子源负离子模式，以多反应监测的扫描方式进行数据采集；离子源温度为80～150℃，毛细管电压为2.5～3.0kV，锥孔电压为10～50V，脱溶剂气温度为320～450℃，脱溶剂气流速为500～700L/h，锥孔气流速为30～80L/h。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱法的质谱条件，还包括：碰撞能为5～40V，检测的离子对为[M–H]^-→[M–H–H₃PO₃]^-。

10.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，当所述待测样品为含双膦酸类药物的细胞培养液时，所述预处理包括：吸取所述细胞培养液中的上清液，并用超纯水洗涤细胞，合并所述上清液和洗涤液，并经稀释或浓缩、过滤后，得到所述预处理后的样品溶液。

11.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用内标法对待测样品中双膦酸类药物的含量进行定量检测，其中，所述内标法的步骤包括：

首先配制含不同浓度双膦酸类药物标准品与相同浓度内标物的混合标准品工作溶液，以标准品与内标物的浓度比为横坐标，以标准品与内标物的色谱峰面积比为纵坐标，建立标准曲线；

对加入有相同浓度内标物的待测样品进行检测，根据所述标准曲线计算待测样品中双膦酸类药物的含量；其中，所述内标物为双膦酸类药物的同位素标记物，或者为待测样品中所不含有的其他种类的双膦酸类药物。

12.如权利要求1-11任一项所述的检测方法，其特征在于，所述双膦酸类药物包括帕米膦酸钠、阿仑膦酸、利赛膦酸钠和唑来膦酸中的一种或多种。