[发明专利]分泌抗大麦黄矮病毒PAV株系单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗大麦黄矮病毒PAV株系单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用提纯的大麦黄矮病毒(BYDV)PAV株系病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗BYDV PAV的单抗杂交瘤细胞株24G4，其保藏号为CGMCC No.13298。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10^‑9，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。利用单抗24G4为核心建立检测小麦植物中BYDV PAV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:81 920和1:1 280倍稀释(w/v,g/mL)。杂交瘤细胞株24G4及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测、诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗大麦黄矮病毒PAV株系单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

由大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf viruses,BYDVs)引起的小麦黄矮病(Wheat yellow dwarf disease)是小麦上重要的病毒病害之一。该病害最早由Oswald和Houston于1951年在美国加利福尼亚州的大麦上发现。目前，小麦黄矮病毒在世界各地均有分布。1960年，BYDVs首次出现在我国西北地区，受到BYDVs侵染的小麦一般减产40％，严重的可达70％以上，因此BYDVs又被称为“小麦癌症”、“黄色瘟疫”。自首次发现以来，小麦黄矮病在20世纪60-80年代又大规模爆发流行了数次，给我国小麦生产和粮食安全带来了重大威胁。

BYDVs在小麦秋苗期和春季返青后均可侵染植株，典型症状是新叶从叶尖开始发黄，植株变矮，叶片颜色为金黄色到鲜黄色，黄化部分约占全叶的1/3-1/2。秋苗期感病的植株矮化明显，分蘖减少，一般不能安全越冬。即使能越冬存活，一般也不能抽穗。穗期感病的植株一般只旗叶发黄，呈鲜黄色，植株矮化不明显，能抽穗，但千粒重减少，根系浅，易拔起。

BYDVs寄主范围较广，目前已知至少可以侵染150多种禾本科作物和杂草，其主要寄主作物既包括小麦、玉米和水稻世界三大粮食作物，也包括大麦、燕麦和黑麦等具有较高经济价值的粮食作物。虽然BYDVs寄主范围广泛，但都集中在单子叶植物范围内，在自然条件下尚未发现能够被BYDVs侵染的双子叶植物。根据寄主范围、对寄主的毒性、蚜虫传播特异性与反应类型等特点，Rochow等将美国的BYDVs分为MAV、PAV、RPV、RMV和SGV 5个株系。在中国，周广和等筛选鉴定出了4个BYDVs株系，即PAV、RMV、GPV和GAV。BYDVs属黄症病毒科(Luteoviridae)，是一种+ss RNA病毒。病毒粒子由正单链RNA和外壳蛋白组成，呈正二十面体(T＝3)，无包膜。目前，根据国际病毒分类委员会关于病毒的分类，BYDVs分布于黄症病毒科(Luteoviridae)的2个属8个种，且还有2个种未被划分到属。在10个种中，BYDV PAV、BYDVPAS、BYDV MAV、BYDV ker II和BYDV ker III这5个种属于黄症病毒属(Luteovirus)；原RPV株系被升级为Cereal yellow dwarf virus-RPV(CYDV RPV)，并和CYDV RPS和MYDV RMV这2个种一起被划分到马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)中；另外，BYDV GPV和BYDV SGV两个种未归类。这些引起大麦黄矮病的各种病毒株系间的核酸同源性非常的低，其实是完全不同的病毒，由于命名的习惯现在还叫大麦黄矮病毒。

据统计，全世界至少有25种蚜虫可以传播BYDVs。而在中国，禾谷缢管蚜(R.padi)、麦长管蚜(S.avenae)、麦二叉蚜(S.graminum)和玉米蚜(R.maidis)是BYDVs的主要传播介体。BYDVs在蚜虫体内以循回型非增殖方式传播。