[发明专利]一种免疫细胞培养基

说明书

技术领域

本发明属于体外培养免疫细胞领域，具体涉及一种免疫细胞培养基。

背景技术

肿瘤过继免疫治疗(adoptive immunotherapy，ACI)是指通过向肿瘤患者输注具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。它包括非特异性激活和特异性激活的效应细胞，前者是采用非特异性刺激因子(IL2、干扰素)刺激前体效应细胞，使其活化为具有抗肿瘤活性的效应细胞，如LAK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine induced kill cells，CIK)等；特异性激活的效应细胞是指采用肿瘤抗原作刺激物所诱导的抗肿瘤效应细胞，如树突状细胞(DC)，细胞毒T淋巴细胞(CD8+细胞)等。

无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基，可以应用于培养免疫细胞，例如淋巴细胞(例如，T淋巴细胞、B细胞、NK细胞等)、树突状细胞(也称DC细胞)、单核/巨噬细胞等。

关于细胞培养体系，现有技术中除了常规的培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，现在已研发出三维培养体系，例如目前市售的高密度细胞培养桶，是一种既可以适用于贴壁细胞，又可以适用于悬浮细胞的三维培养体系，可以快速地培养大量细胞，且可以进行为期半年以上的长期细胞培养，不需要经常更换耗材，与传统的培养板、培养皿和培养瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本领域研发人员的广泛关注。

然而，现有技术中的无血清培养基大多适用于中等规模的细胞培养体系，一般来说无法适用于大规模的、高密度的细胞培养；另一方面，现有的无血清培养基仅适用于培养板、培养皿、培养瓶等二维的细胞培养体系，无法适用于高密度细胞培养桶这样的三维培养体系。

中国专利申请(CN106047807A)公布了一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基、人白蛋白12-16g/L、转铁蛋白20-25mg/L、人重组胰岛素24-30mg/L，L-谷氨酰胺8-10g/L、HEPES 5-7g/L以及白介素-23x10⁵-8x10⁵IU/L。

因此，开发专用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的培养基是目前免疫细胞生产所迫切需要的。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种免疫细胞培养基。本发明免疫细胞培养基组分简单、生产成本低，极大地提高了免疫细胞的增殖速度和存活率，不仅适用于免疫细胞中小规模的生产，同时也适用于免疫细胞的高密度培养体系。

本发明通过以下技术方案实现：

一种免疫细胞培养基，包括以下成分及其浓度：基础培养基6.5-13g/L，壳聚糖1.5-3g/L，精氨酸395-455mg/L，谷氨酰胺17-21g/L，维生素A 30-45mg/L，维生素C 15-20mg/L，嵌段式聚醚F-6840-50mg/L，硫酸锌1-2mg/L，γ-干扰素250-330IU/mL，胰岛素25-30μg/L，柠檬酸铁4.5-7mg/L，氯化铁0.15-1.5mg/L，EDTA-2Na 3.15-4.5mg/L和酚红钠6.35-6.5mg/L。

优选地，所述免疫细胞培养基由以下成分及浓度组成：基础培养基干粉8.5g/L，壳聚糖2.75g/L，精氨酸415mg/L，谷氨酰胺19.3g/L，维生素A 37.4mg/L，维生素C 18.65mg/L，嵌段式聚醚F-6843.45mg/L，硫酸锌1.75mg/L，γ-干扰素289IU/mL，胰岛素26.75μg/L，柠檬酸铁6.43mg/L，氯化铁1.32mg/L，EDTA-2Na3.68mg/L和酚红钠6.45mg/L。

优选地，所述培养基中基础细胞培养基为DMEM、Ham F12、PRMI1640中任一种。