[发明专利]HPV高危18型恒温检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPV高危18型恒温检测试剂盒，特别涉及一种不依赖于高能能量分子的恒温扩增技术。

背景技术

1983年，Mullis等发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，30多年间，PCR技术得到长足发展，由于其在灵敏度和特异性方面的优势，PCR技术被迅速运用到科学研究和临床研究的各个方面。这种类似于DNA的天然复制过程的PCR技术，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

与传统的PCR技术相比，恒温扩增技术主要利用重组酶的活性，不进行核酸解链和退火即可在恒温条件下（如37℃）进行核酸的扩增，因此不需要昂贵的仪器，也避免了高温对酶的损耗。同时恒温扩增技术在体系中不需要加入过量的引物，降低了引物与模板错配或生成引物二聚体的可能性。恒温扩增技术日益受到重视。

人乳头瘤病毒（HPV）被分类成“高风险”病毒，可引起细胞变异，并且可以导致生殖器官癌症，子宫颈癌、阴道癌、肛门和阴茎的癌症都有可能由HPV引起的。其中子宫颈癌是人体最常见的癌瘤之一，不但在女性生殖器官癌瘤中占首位，而且是女性各种恶性肿瘤中最多见的癌瘤。根据29个省、市，自治区回顾调查我国宫颈癌死亡率占总癌症死亡率的第四位，占女性癌的第二位。因此人乳头瘤病毒的检测对于筛查子宫颈癌有着重要意义。

本发明HPV高危18型恒温检测试剂盒将恒温扩增技术应用到HPV高危18型的检测上，缩短了反应时间，降低了体系对反应条件的要求，大大地提高了检测的效率，有利于临床的诊断及治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HPV高危18型恒温检测试剂盒，包括反应液，启动液，反应酶系，HPV高危18型特异性引物。

HPV高危18型恒温检测试剂盒反应液的具体成分如下：

Tris-HCl（pH8.3） 50mM

KCl 60mM

二硫苏糖醇2mM

甜菜碱1M

海藻糖5.5%

PEG 5.5%

BSA 0.1mg/mL

HPV高危18型恒温检测试剂盒启动液的具体组分如下：

氯化镁10mM

HPV高危18型恒温检测试剂盒反应酶系的具体组分如下：

dNTPs 200uM

聚合酶Bsu 50U

单链结合蛋白262ng/ul

重组酶（E.coli RecT） 360ng/ul

上游引物200nM

下游引物200nM

HPV高危18型恒温检测试剂盒特异性引物序列如下：

上游引物：GGACCGAAAACGGTGTATATAAAAGATGTGAG

下游引物：ATCAGGTAGCTTGTAGGGTCGCCGTGTTGGA

本发明的有益效果：本发明的恒温扩增结果好，特异性好，灵敏度高。

附图说明

图1为实施例1的电泳结果图。

具体实施方式

下面结合具体的实验，进一步说明HPV高危18型恒温检测试剂盒的优势。

实施例1：本实施例用hela细胞作为样本，用人基因组DNA作为阴性对照。取两个200ul反应管，分别标记为反应管1和反应管2。在分别加入20ul反应液、5ul反应酶系到反应管1和2中，在反应管1中加入2ul hela细胞，在反应管2中加入2ul 人基因组DNA作为阴性对照，用灭菌水补足体系到45ul，混匀后再分别加入5ul启动液。

选择恒温水浴锅提供反应所需要的恒温环境，设置恒温水浴锅温度为37℃，反应时间为30min。

反应结束后，取10ul产物，用2%的琼脂糖凝胶进行电泳。

从图中可以看出，在250bp处有清晰的电泳条带，为样本的目的条带，阴性对照泳道干净，说明本发明的恒温扩增结果好，特异性好，灵敏度高。

SEQUENCE LISTING

<110> 广州和实生物技术有限公司

<120> HPV高危18型恒温检测试剂盒

<130> 2016

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列