[发明专利]一种维持CIK细胞高杀伤力的冻存保护剂

说明书

本发明公开了一种维持CIK细胞高杀伤力的冻存保护剂，所述冻存保护剂由RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亚砜、环状六肽Cyclo(‑Gly‑Thr‑Phe‑Leu‑Tyr‑Ala‑)组成；RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亚砜按照体积比6:3:1混合；所述环状六肽Cyclo(‑Gly‑Thr‑Phe‑Leu‑Tyr‑Ala‑)的浓度为2‑4μg/ml。本发明冻存保护剂能在保证CIK细胞冻存复苏率的基础上最大限度维持CIK细胞的高杀伤力，延续miRNA‑146a低表达所带来的强杀伤力。

技术领域

本发明属于免疫领域，涉及CIK细胞的培养，具体涉及一种维持CIK细胞高杀伤力的冻存保护剂。

背景技术

申请人于2016年12月22日提交了一件CIK细胞培养的专利申请，该申请公开了miRNA-146a及其抑制剂在CIK细胞培养方面的应用，miRNA-146a可以作为药物靶标提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。该申请的说明书公开了miRNA-146a下调表达的CIK细胞比miRNA-146a正常表达的CIK细胞具有更高的杀伤力，且差异非常显著。申请人还发现，环状六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)为miRNA-146a的有效抑制剂。

出于实验需要，研究人员通常需要将细胞进行冻存，以便日后复苏使用。申请人发现，miRNA-146a低表达的CIK细胞在冻存前虽然对白血病细胞的杀伤力非常高，但是，冻存复苏后杀伤力明显下降。这表明，传统的细胞冻存保护剂可能不适用于miRNA-146a低表达CIK细胞的冻存，虽然能维持其复苏率，但是不能维持其对白血病细胞的杀伤力。

传统的细胞冻存保护剂多为基于DMSO的标准冻存液，由培养基、胎牛血清和DMSO组成。申请人在CIK细胞常用冻存保护剂基础上[RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亚砜按照体积比5:4:1混合，可参见文献：冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞内因子表达的影响，郑州大学学报(医学版)2014年1月]进行了优化研究，试图在保证CIK细胞冻存复苏率的基础上最大限度维持CIK细胞的高杀伤力。

发明内容

本发明旨在克服背景技术中存在的不足，提供一种维持CIK细胞高杀伤力的冻存保护剂，在保证CIK细胞冻存复苏率的基础上最大限度维持CIK细胞的高杀伤力。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种维持CIK细胞高杀伤力的冻存保护剂，由RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亚砜、环状六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)组成。

优选地，RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亚砜按照体积比6:3:1混合。

优选地，所述环状六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)的浓度为2-4μg/ml。

使用上述冻存保护剂冻存CIK细胞的方法：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，转至-80℃低温冰箱放置。

本发明优点：

本发明冻存保护剂能在保证CIK细胞冻存复苏率的基础上最大限度维持CIK细胞的高杀伤力，延续miRNA-146a低表达所带来的强杀伤力。

附图说明

图1为不同组效应细胞对白血病K562/A02细胞系的杀伤活性；

图2为不同组效应细胞对白血病THP-1细胞系的杀伤活性；

图3为不同组效应细胞对白血病HL-60细胞系的杀伤活性。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。