[发明专利]一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法

权利要求书

1.一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法，五种人参皂苷类成分为20(S)-人参皂苷F1及人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd；该方法采用超高效液相色谱-质谱联用法，其特征在于该含量测定方法如下：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源，ESI源；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关电压参数设定如下表：

标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、20(S)-人参皂苷F₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；

系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb₁系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F₁系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液；

供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流60-90分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；

测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各2-5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。

2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述供试液制备中加热回流时间为75min。

3.根据权利要求1-2任一项所述的含量测定方法，其特征在于该含量测定方法如下：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0-2分钟，流动相A由20％线性变化到50％，2.01分钟，流动相A变为80％，保持3分钟；流速：0.5ml/min；质谱条件，离子源：电喷雾离子源ESI源；监测模式：负离子多反应监测模式；脱溶剂气温度：500℃；毛细管电压：3.00kV；锥孔电压：20V；监测离子对及相关参数设定如下表：

标准储备溶液：分别称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、20(S)-人参皂苷F₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd标准品各10.0mg标准品各10mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.1g/L的标准储备溶液；

系列标准溶液：按照人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb₁系列标准溶液浓度为0.01μg/ml-1.00μg/ml，20(S)-人参皂苷F₁系列标准溶液浓度为0.05μg/ml-1.00μg/ml，精密吸取标准储备溶液，置10mL量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，得不同浓度的系列标准溶液；

供试品溶液的制备：取血栓心脉宁片，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，置水浴中加热回流75分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；再精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，以20％乙腈水溶液稀释并定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液，备用；

测定法：分别精密吸取对照品系列溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，以标准曲线法计算含量，即得。