[发明专利]一种定量检测海参多糖的方法

说明书

本发明公开了一种定量检测海参多糖的方法，包括步骤：向三氟乙酸水溶液中加入硫酸软骨素及岩藻糖，配制标准样品溶液；提取待测海参或海参制品样品中的多糖；酸水解、除酸，加入氨水、内标物乳糖、衍生化；液相色谱‑质谱联用检测含有硫酸软骨素二糖衍生物、岩藻糖衍生物的各浓度标准样品溶液及待测样品溶液，得出待测样品中硫酸软骨素和岩藻糖的含量，进而得到待测样品中岩藻聚糖和岩藻糖基化硫酸软骨素的含量。本发明方法用于快速定量测定海参多糖，更准确，方便，且效率高，能够对不同种类、经过不同加工处理的海参多糖进行准确的定量测定，为不同的海参加工产品的质量控制提供了有效手段。

技术领域

本发明涉及一种检测生物大分子的方法，更具体，涉及定量检测海参多糖的方法。

背景技术

海参中营养物质种类和含量丰富，海参多糖在海参中的营养成分占重要地位。海参多糖(sea cucumber polysaccharide)的结构主要有两类：一类是海参糖胺聚糖，又称岩藻糖化硫酸软骨素，另一类是海参岩藻聚糖。虽然两类的糖基组成不同，但它们的糖链上都被不同程度的硫酸酯化。研究发现海参多糖对人体的生理功能调控、维系生命好的状态具有很重要的意义，主要表现在抵抗血栓、肿瘤、凝血和降低血清胆固醇以及提高身体免疫力等方面。

目前社会对海参的需求也越来越多，海参加工产品多种多样，导致产品品质也各有不同。因此，定量检测海参多糖是相关加工工艺产品的质量控制的必要措施，也是对含这类多糖的食品质量评价的有力手段。

目前，对这些海参多糖的定量检测，主要集中在对降解产生的不同单糖组分的检测分析，最为常用的是化学显色法。例如经过分离纯化后，通过咔唑法测定糖醛酸含量从而间接测定含糖醛酸多糖，以及通过Elson-Morgan法测定氨基糖含量。但这些化学显色法缺乏特异性，难以得到准确的结果。申请号200810016622.8的“一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法”也作了相关报道，该方法通过酶解醇沉等步骤，以岩藻糖含量为基准，乘以转化系数得到了海参多糖的含量。但是，目前还缺乏同时对岩藻糖基化硫酸软骨素和岩藻多糖这两种多糖进行定量的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于实现海参多糖的定量分析，使海参中的海参糖胺聚糖和海参岩藻聚糖能够同时、快速、准确的完成定量检测。

为了达到上述目的，本发明提供了一种定量检测海参多糖的方法，包括如下步骤：

S1、向1.3mol/L的三氟乙酸水溶液中加入硫酸软骨素及岩藻糖，配制一系列浓度梯度的含有硫酸软骨素及岩藻糖的标准样品溶液；

所述硫酸软骨素及岩藻糖的浓度均在0.02～0.4mg/ml范围内；

所述硫酸软骨素及岩藻糖最优浓度范围为0.04～0.2mg/ml；

S2、提取待测样品中的多糖：将待测样品粉碎、混匀后，准确称量，然后采用酶解后醇沉法提取、冻干，得到待测样品海参多糖提取物，向所述待测样品海参多糖提取物中加入三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液的浓度为1.3mol/L，得到待测样品海参多糖溶液；

所述待测样品为海参或海参制品；

优选方式下，所述待测样品海参多糖溶液中每毫升三氟乙酸水溶液加入所述待测样品海参多糖提取物0.1～100mg；

S3、准确量取步骤S1制得的各浓度标准溶液及步骤S2制得的待测样品溶液、密封，分别准确1.00ml标准溶液和待测样品溶液，密封，在105℃下水解3h，放置室温，采用冷冻离心浓缩除去溶剂，收集固相；向所述固相物质中加入0.3～1mL甲醇或水，再采用冷冻离心浓缩除去溶剂，重复三次，达到除酸目的，得到各浓度标准样品溶液及待测样品溶液的固相残余物；