[发明专利]检测地西泮的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测地西泮的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有地西泮偶联抗原的酶标板、地西泮单克隆抗体、酶标记抗抗体、地西泮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测地西泮的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测动物组织、尿液、饲料、水质中地西泮的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测地西泮的酶联免疫试剂盒，其特别适于动物组织、尿液、饲料、水质中地西泮含量的检测。

背景技术

地西泮，又称安定，是一种中枢神经系统镇静剂，其化学名称为1-甲基-5-苯基-7-氯-1,3-二氢-1,4-苯并二氮卓-2-酮，它主要用于人和动物镇静、催眠、癫痫的治疗；畜牧生产中用作动物抗运输应激的药物，亦被大量非法用作动物增重促进剂。当人体摄入含有地西泮残留的食物后，肝脏负担加重，头脑昏昏沉沉，记忆受损，个别人出现皮疹、白细胞减少及运动神经和肌肉功能受到抑制，为此农业部规定所有食品动物中均不得检出地西泮及其盐和酯等。

目前，国内外已报道的地西泮及其代谢物的测定方法有HPLC、HPLC-MS/MS、GC-MS、GC-ECD、固相萃取-紫外导数光谱检测、TLC-UV等。HPLC、TLC等方法受灵敏度限制，无法满足目前残留分析检测的要求；HPLC-MS/MS作为目前报道最多的方法，可以同时进行地西泮及其代谢物的定性定量分析，但需要昂贵的仪器和专门的技术人员，样品前处理过程复杂且花费高、费时长，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。酶联免疫吸附分析法(ELISA)具有简便快速、特异灵敏、样品容量大、分析成本低的特点，可以简化甚至省去样品净化步骤，在大量样本和现场样本快速筛选检测中显示出独特优势，能够更好地满足我国食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作，极具发展潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构简单、使用方便、价格便宜、便于携带的用于地西泮检测的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样本筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有地西泮偶联抗原的酶标板、地西泮单克隆抗体、酶标记抗抗体、地西泮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液；所述地西泮偶联抗原是由地西泮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原，所述地西泮半抗原是由马来酰亚胺基苯甲酸与草酰氯反应后，再与去甲地西泮反应得到，分子结构式为：

所述地西泮单克隆抗体是以地西泮偶联抗原作为免疫原制备获得。

所述酶标记抗抗体的抗抗体为羊抗鼠抗抗体。

所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶；酶标记抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括地西泮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。

所述地西泮标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.2μg/L、0.4μg/L、0.8μg/L、1.6μg/L。

所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，底物液A液为过氧化氢或过氧化脲，底物液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液。