[发明专利]一种重组结核病疫苗，其制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种重组结核病疫苗，其制备方法及应用。本发明的疫苗能有效增强接种人群机体的特异I型细胞免疫，强化接种人群对结核杆菌的免疫防护力；本发明的疫苗配合卡介苗联合应用，能够改变单独使用BCG对部分个体以及感染过结核分枝杆菌人群无效的状况，达到降低结核病发病率的目的。

技术领域

本发明属于生物工程和免疫领域，更具体地，本发明涉及一种重组结核病疫苗，其制备方法及应用。

背景技术

结核病(tuberculosis，TB)已成为当今世界威胁人类健康的第一大传染病。据WHO统计，全球现有结核病患者约2000万，2013年新发病例约900万，每年有近200万人死于结核病。在中国，有5.5亿人感染结核，年发病人数约130万，位居全球第2位。

结核病的致病菌是结核杆菌，属于放线菌目分枝杆菌科分枝杆菌属。结核杆菌主要通过呼吸道传播，还可通过消化道进入人体。结核杆菌被吞噬细胞吞噬后可经淋巴-血循环散播到全身，在人体免疫力低下时而造成多种系统或脏器的结核病变，如骨结核、肾结核、生殖器结核、结核性脑膜炎等。

传统疫苗卡介苗(BCG)作为当今世界上唯一预防结核病的疫苗，长期使用结果表明，其免疫效果存在不足，BCG对儿童结核病能起到一定的预防作用，但对于成年人结核病的保护能力变化很大(0～80％)，并且无法应用于免疫缺陷患者；同时随着人口流动的增加、多重耐药结核菌株的出现、结核分枝杆菌与HIV伴发感染的发生以及BCG接种防护的自身局限性等因素，结核病的发生率在全球呈明显上升趋势，但目前尚没有新的疫苗可以完全取代BCG。

因此，研发更有效、更安全、适用于各类人群使用的防治结核病的疫苗，以及研究更为有效的临床治疗手段，势在必行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组结核病疫苗，其制备方法及应用。

在本发明的第一方面，提供一种重组病毒载体，所述的重组病毒载体包括一表达盒，所述表达盒包括操作性连接的以下抗原的编码序列：ESAT6、Rv1733c、Rv2626c、RpfD。

在一个优选例中，所述的表达盒中还包括以下抗原的编码序列：Ag85B。

在另一优选例中，所述的表达盒中，按照5’→3’的次序，抗原依次为ESAT6，Rv1733c，Rv2626c，RpfD；或抗原依次为Ag85B，ESAT6，Rv1733c，Rv2626c，RpfD。

在另一优选例中，所述的表达盒中，在所述抗原的上游，还包括Kozak序列和TPA序列；较佳地，按照5’→3’的次序，Kozak序列和TPA序列以Kozak-ATG-TPA的方式连接。

在另一优选例中，所述的表达盒中，还包括：位于所述的抗原的编码序列的上游的启动子，和/或位于所述的抗原的编码序列下游的终止子；从而构成表达所述抗原的表达盒。

在另一优选例中，各个抗原之间，以限制性内切酶序列相间隔。

在另一优选例中，所述的ESAT6的编码序列如SEQ ID NO：2所示；所述的Rv1733c的编码序列如SEQ ID NO：3所示；所述的Rv2626c的编码序列如SEQ ID NO：4所示；所述的RpfD的编码序列如SEQ ID NO：5所示；或所述的Ag85BSEQ ID NO：1所示。

在本发明的另一方面，提供所述的重组病毒载体的用途，用于制备重组病毒，所述的重组病毒能够诱导机体产生对抗结核杆菌的免疫保护力。

在本发明的另一方面，提供一种制备重组病毒的方法，所述方法包括：通过同源重组将所述的重组病毒载体导入病毒中，获得重组病毒。

在一个优选例中，所述的病毒选自：痘(痘苗)病毒，腺病毒、单纯疱疹病毒、微小RNA病毒、黄病毒；较佳地是痘病毒和腺病毒；更佳地是牛痘病毒MVA株或复制缺陷型腺病毒Ad5。