[发明专利]与小麦寡分蘖基因Ltn3共分离的分子标记R207及其应用

权利要求书

1.与小麦寡分蘖基因Ltn3共分离的分子标记R207，其特征在于，标记R207位于小麦2D染色体长臂上，核苷酸序列如下：5’-GGCATCTACATTCGCGTTCNTGCCTGCAGCGGTCAGTCTGATCACCAG-3’；其中，N为C或T；C对应于寡分蘖表型。

2.用于检测权利要求1所述分子标记R207的试剂在鉴定寡分蘖小麦品种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测小麦的基因组DNA；

2)以待测小麦的基因组DNA为模板，基于KASP检测平台技术设计引物，进行荧光定量PCR扩增；

3)采用荧光检测仪分析PCR产物，进行基因分型；

步骤2)的引物序列如下：

R207-1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGCATCTACATTCGCGTTCC-3’；

R207-2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGCATCTACATTCGCGTTCT-3’；

R207-3:5’-CTGGTGATCAGACTGACCGC-3’；

并且，引物R207-1和R207-2的5’端分别连有不同的荧光基团FAM、HEX。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中荧光定量PCR扩增反应体系：2×KASP Mastermix 5μL，KASP Assay Mix 0.14μL，模板DNA 50ng、Dnase/RNase-free去离子水加至总量为10μL；其中，KASP Assay Mix中含有引物R207-1、R207-2和R207-3，体积比为2:2:5。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中荧光定量PCR程序：95℃活化15min；95℃变性20s，65℃退火延伸60s，循环10次，每次退火延伸温度降低1℃；94℃变性20s，57℃退火延伸60s，循环30次；37℃60s，采集荧光信号。

6.基于KASP技术检测权利要求1所述分子标记R207的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：

R207-1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGCATCTACATTCGCGTTCC-3’；

R207-2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGCATCTACATTCGCGTTCT-3’；

R207-3:5’-CTGGTGATCAGACTGACCGC-3’；

并且，引物R207-1和R207-2的5’端分别连有不同的荧光基团FAM、HEX。

7.权利要求6所述的引物组合在寡分蘖小麦品种分子标记辅助育种中的应用。