[发明专利]NK细胞体外扩增培养基组合和培养方法

权利要求书

1.一种NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，包括使用NK细胞体外扩增培养基组合，所述方法包括：

基础培养：将分离的单个核细胞接种于基础培养基中培养1-2天获得基础培养细胞；

诱导培养：将所述基础培养细胞接种于诱导培养基中培养2-4天获得诱导培养细胞；

增殖培养：将所述诱导培养细胞接种于增殖培养基中培养4-7天获得增殖培养细胞；

活化适应：将所述增殖培养细胞接种于活化适应培养基中培养0.5-1.5天；

所述基础培养、诱导培养、增殖培养和活化适应在免疫细胞体外扩增装置中进行，所述装置包括细胞培养袋(1)和承载所述细胞培养袋(1)的承载台(3)，该装置还包括容纳于所述细胞培养袋(1)中的磁性浮球(2)以及在悬挂于所述细胞培养袋(1)上方并且能够驱动所述磁性浮球(2)在所述细胞培养袋(1)中移动的磁性悬挂驱动器(4)，所述磁性悬挂驱动器(4)包括能够吸引所述磁性浮球(2)的磁体片(41)和能够悬挂且驱动所述磁体片(41)在所述细胞培养袋(1)上方移动的悬挂驱动架(42)；所述细胞培养袋(1)中充有细胞培养液，述细胞培养液中含有培养基以及待扩增的细胞；所述磁性浮球(2)在浮力和磁力的合力作用下漂浮在培养液液面上；所述磁体片(41)能够在所述细胞培养袋(1)上方往复移动，从而通过磁力的作用，驱动所述磁性浮球(2)在漂浮状态下在培养液液面往复移动，所述磁性浮球(2)在培养液液面以下的部分能够搅拌培养液，从而在所述细胞培养袋(1)中模拟血液流动的体内环境；

所述NK细胞体外扩增培养基组合包括：基础培养基、诱导培养基、增殖培养基和活化适应培养基；

其中，所述基础培养基的组成成分包括：RPMI-1640培养基、GT-T551培养基、庆大霉素和BSA；

所述诱导培养基的组成成分包括：RPMI-1640培养基、GT-T551培养基、BSA、香菇多糖、灵芝多糖、茶多酚、大蒜素和紫杉醇；

所述增殖培养基的组成成分包括：RPMI-1640培养基、GT-T551培养基、BSA和白细胞介素；所述白细胞介素为IL-12、IL-15、IL-18和IL-21；

所述活化适应培养基包括：RPMI-1640培养基、GT-T551培养基、胰岛素、转铁蛋白和谷氨酰胺。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种的细胞密度为4.5×10⁵个/mL-5.5×10⁵个/mL。

3.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述基础培养基包括以下含量的各组分：庆大霉素50-90IU/mL、BSA 100-300μg/mL、RPMI-1640培养基与GT-T551培养基的体积比为1：0.8-1.2。

4.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基包括以下含量的各组分：BSA 100-300μg/mL、香菇多糖50-80μg/mL、灵芝多糖50-80μg/mL、茶多酚20-40μg/mL、大蒜素20-40μg/mL、紫杉醇20-40μg/mL，RPMI-1640培养基与GT-T551培养基的体积比为1：1-1.4。

5.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括以下含量的各组分：BSA 100-300μg/mL、IL-12 5-15ng/mL、IL-15 5-15ng/mL、IL-18 5-15ng/mL和IL-21 5-15ng/mL，RPMI-1640培养基与GT-T551培养基的体积比为1：1.2-1.6。

6.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述活化适应培养基包括以下含量的各组分：胰岛素1.5-3μg/mL、转铁蛋白2-3μg/mL、谷氨酰胺1-2mM，RPMI-1640培养基与GT-T551培养基的体积比为1：2-4。