[发明专利]促进土党参离体增殖的套盒和方法

说明书

本发明公开了一种促进土党参离体增殖的套盒，套盒包含用以诱导出带不定芽块的茎段的培养基1和用以反复继代培养培养基2，培养基1和培养基2均包含以下组分：6‑苄基氨基嘌呤、噻苯隆和MS培养液；同时，本发明公开了一种促进土党参离体增殖的方法。采用本发明的套盒和方法，解决了采用NAA和BA配比进行繁殖的过程中，繁殖苗细弱、枯黄、死亡以及繁殖率低的问题；以30天为培养周期，利用本发明的套盒可以使土党参的繁殖倍率达到10‑15倍，并获得健壮无菌苗，生根率和移栽成活率均为100％。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是促进土党参离体增殖的套盒和方法。

背景技术

目前土党参离体快速繁殖的研究较少。王祝年等(2007)以成熟果实为外植体，取种子进行无菌萌发获得幼苗，将幼苗切为茎段，采用MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1，以20天为周期进行繁殖，繁殖率为5-6倍，之后在生根培养基MS+NAA 0.5mg·L^-1上进行生根，生根率为100％，移栽后获得了完整植株。我们采用相同的方法进行种子无菌萌发获得幼苗，将幼苗切为茎段，采用MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1进行繁殖时，接种的茎段侧芽萌发，但不继续伸长，逐渐黄化死亡，未能重现文献的结果，表明现有的土党参离体快速繁殖方法并不可靠。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能实现土党参离体快速繁殖的套盒和方法，以提高土党参的繁殖率。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：促进土党参离体快速增殖的套盒，所述套盒包含用以诱导出带不定芽块的茎段的培养基1和用以反复继代培养培养基2，所述培养基1和培养基2均包含以下组分：6-苄基氨基嘌呤、噻苯隆和MS培养液。由此，本发明首次加入噻苯隆(TDZ)配合6-苄基氨基嘌呤(BA)诱导带不定芽块的茎段，解决了仅采用BA和NAA进行初次继代时存在的繁殖率低、植株黄化不能持续继代繁殖的问题；利用本发明的套盒可以促进土党参茎段反复继代至少5次，经壮苗、生根、移栽后获得数量可观的无菌土党参苗。

优选地，所述培养基1中，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.4～0.6mg/L，噻苯隆的浓度为0.01～0.1mg/L；所述培养基2中，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.4～0.6mg/L，噻苯隆浓度为0.01～0.02mg/L。应当说明的是，培养基2中采用TDZ和BA的配合在茎段基部诱导出的不定芽块，在培养基3中继代，此类带不定芽块的茎段可在较低浓度的TDZ和BA中继代培养5次以上；以30天为培养周期，繁殖倍数为10～15倍，植株基部丛生，高度约为4～6cm。

优选地，所述培养基1和培养基2分别还包括以下组分：25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的琼脂。由此，培养基1包括以下组分：MS培养液、0.4～0.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.01～0.1mg/L的噻苯隆、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的琼脂；培养基2包括以下组分：MS培养液、0.4～0.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.01～0.02mg/L的噻苯隆、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的琼脂。

优选地，所述套盒还包含用以继代和壮苗的培养基3，所述培养基3包含以下组分：MS培养液、0.5～1.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.05～0.1mg/L的萘乙酸、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的琼脂；由此，在壮苗阶段，采用此配方的培养基3可使不定芽块消失，叶色深绿、生长健壮、叶柄处带有芽点，符合生根和成苗要求。

优选地，所述套盒还包含用于生根的培养基4和作为前处理液的100～300mg/L的吲哚丁酸；所述培养基4包含以下组分：MS培养液、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的琼脂。由此，本套盒采用此配方，可使茎段生根迅速、侧根多，根系质量好。