[发明专利]大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。本发明通过优化鸡α干扰素基因序列并合成全基因，然后构建重组表达载体转化大肠杆菌，最后通过诱导表达和蛋白纯化获得纯度和含量较高的rChIFN‑α蛋白。重组干扰素rChIFN‑α在CEK细胞、鸡胚上和鸡体内对FAV‑4均具有抗病毒作用。其中，在CEK细胞上的抗病毒活性为4.17×10⁶IU/mL；在鸡胚上能明显抑制FAV‑4增殖，延迟鸡胚的死亡时间；在鸡体内也能显著抑制FAV‑4复制，延迟感染鸡的死亡时间。说明重组干扰素rChIFN‑α对FAV‑4具有较好的抗病毒作用。

技术领域

本发明涉及一种大肠杆菌重组鸡α干扰素，同时还涉及重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。

背景技术

我国是一个农业大国，养殖业在我国占有重要地位。但由于经济发展不平衡等因素，目前养禽业存在着多种饲养模式并存、疫病情况复杂、家禽及其制品流通不规范等问题。据不完全统计，对养禽业造成危害的疫病已达80余种，其中以传染病为多，约占禽病总数的75％以上。据估计，我国每年因各类禽病所致家禽死亡率高达20％，远远高于发达国家8％的水平。

近年来，鸡马立克氏病、新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、禽流感、传染性贫血、减蛋综合征等病毒病已给养禽业带来巨大的经济损失。如2015年6月在山东、河南、安徽等地发生的以心包积液为特点，以肉食鸡、三黄鸡、麻黄鸡为主的死亡病症，发病无特征，出现蒸笼死亡、添加抗菌药物治疗加速等现象，家禽死亡率高达90％，已成为危害养鸡业最为严重的疾病之一。该病为安卡拉病毒病(心包积水-肝炎症)，由禽腺病毒(Adenovirus，FAV)引起，主要感染5～11周龄蛋鸡，发病率高，发病速度快，包括垂直传播和水平传播，日龄越小发病率越高，死亡也越多，成年鸡也有发生。解剖主要表现为心包积水，约10～30毫升黄色透明液体。目前针对安卡拉病毒病暂无较好的预防和治疗方法，主要采用将禽腺病毒疫苗与卵黄抗体相结合的方式防控。有专家称抗病毒药物-干扰素可能对腺病毒有较好的治疗效果。

干扰素(Interferon alpha，IFN-α)是一类具有抗病毒、抗肿瘤、抗寄生虫和调节机体免疫(免疫佐剂)作用的糖蛋白。ChIFN-α具有安全性高、毒副作用小、效果迅速等特点，是治疗现代禽类疾病的理想药物之一。ChIFN-α经基因工程改造后可延长半衰期，使效力更加稳定持久。

近年来，各国学者广泛开展禽类重组干扰素的抗病毒研究。王新卫等将H9N2亚型禽流感病毒与干扰素一同接种鸡胚，运用HA方法测定病毒效价，研究发现干扰素抑制H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚内增殖，并表现出剂量依赖性。王艳等研究发现给雏鸡注射干扰素可以提高新城疫灭活苗抗体的滴度。经研究证实，重组鸡a-干扰素能够显著抑制新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、马立克病毒、禽流感病毒等的增殖，展现出广阔的应用前景。因此，研制一种抗FAV重组鸡a-干扰素具有重要的社会意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种大肠杆菌重组鸡α干扰素。

同时，本发明还提供一种编码上述鸡α干扰素的核苷酸序列。

再者，本发明提供一种包含上述序列的重组表达载体，以及包含该重组表达载体的重组表达工程菌。

最后，本发明提供一种上述鸡α干扰素的制备方法和应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

大肠杆菌重组鸡α干扰素(rChIFN-α)，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列编码。

编码大肠杆菌重组鸡α干扰素的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，是根据大肠杆菌密码子偏嗜性优化得到的开放阅读框。

重组表达载体，其上插入有如SEQ ID NO:1所示的编码大肠杆菌重组鸡α干扰素的核苷酸序列。