[发明专利]一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定性与定量分析方法

说明书

本发明公开了一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定性分析方法，采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪检测。本发明还公开了一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定量分析方法，采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测。本发明可对柿叶提取物中黄酮类有效成分进行定性定量分析，有利于对柿叶提取物中药效物质的基础研究，同时，也为提高柿叶提取物的质量标准、有效监控以此为原料的中成药产品质量提供了科学依据。本发明完善了柿叶提取物质量评价体系，定性和定量分析方法稳定可靠、灵敏准确，检测周期短，且样品前处理简单，可用于实际生产中柿叶提取物及其制剂的质量监控。

技术领域

本发明涉及中药提取物分析方法技术领域，尤其涉及一种柿叶提取物中黄酮类有效成分的定性与定量分析方法。

背景技术

柿叶为柿树科植物柿Diospyros kaki Thunb.的干燥叶子，柿叶中主要含有黄酮类、萜类、酚酸类和脂肪酸等化学成分，迄今为止，国内外文献报道从柿叶植物中一共分离得到90余个化合物。柿叶具有清除自由基、抗氧化、神经保护、抗过敏、抑制血栓形成、抗动脉粥样硬化等药理作用，主要用于高血压，脑动脉硬化症，冠心病，心绞痛(中草药，2014，45(21):3195-3203)。

目前，已报道从柿叶中分离得到24个黄酮类化合物，以槲皮素为苷元的化合物分别是：槲皮素(quercetin)，芦丁(rutin)，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(isoquercitrin)，金丝桃苷(hyperoside)等；以山柰酚为苷元的化合物分别是：山柰酚(kampferol)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(astragalin)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(trifolin)，山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside)等；以杨梅素为苷元的化合物分别是：杨梅素(myricetin)，annulatin，杨梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(myricetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside)，杨梅素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(myricetin-3-O-β-D-glucopyranoside)等；以牡荆素为苷元的化合物分别是：牡荆素(vitexin)，2″-O-鼠李糖牡荆素(2″-O-rhamnosyl vitexin)等。

柿叶提取物的质量标准现收载于《中国药典》2015年版一部，用薄层色谱进行鉴别，用高效液相色谱(HPLC)法进行总黄酮含量测定。关于柿叶成分含量测定的文献报道主要有：以芦丁和熊果酸为标准品，用分光光度法测定总黄酮和总三萜含量；利用HPLC法测定，总黄酮的质量＝槲皮素的质量×2.55+山柰酚的质量×2.59；王丽峰等建立了一种反相高效液相色谱法，同时测定柿叶中黄酮(芦丁、金丝桃苷、槲皮素)和三萜(齐墩果酸、熊果酸)化合物含量(分析试验室,2008,27增刊:176-179)；Fan等采用反相高效液相色谱法，同时测定柿叶中3种三萜化合物barbinervic acid、rotungenic acid和24-hydroxy ursolicacid含量(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2006,41:950-956)；刘军等采用RP-HPLC法，以芦丁、山柰酚和槲皮素作为对照品，对12批柿叶样本中黄酮类成分进行指纹图谱研究，确定12个峰为共有峰，占总峰面积的90％以上(中国中药杂志,2008,33(6):694-695)。

目前，柿叶提取物主要作为中成药脑心清片/胶囊的原料。在国内市场上柿叶提取物的生产企业有多家，提取方法有多种，如水提、醇提、碱水提酸沉淀法等，提取工艺各不相同，质量参差不齐，为了防止类似银杏叶提取物及其制剂的不良事件的发生，确保以柿叶提取物为原料的相关制剂的质量稳定可控、临床有效安全，需要对柿叶提取物中的黄酮类多个成分进行定性定量分析。

发明内容