[发明专利]一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法

权利要求书

1.一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于包括以下步骤：

（a）藻泥制备：将处于对数生长期的雨生红球藻藻液收集于不锈钢搅拌罐中进行静置沉降，去除部分上清培养基，得到细胞密度为10~20 g/L的浓缩藻液；将冻存液按照0.5~10：1的体积比加入到浓缩藻液中，搅拌混合均匀，再加入质量比为0.5~20% w/v的脱脂乳粉，搅拌混匀后离心去除上清液，得到用于冷冻保藏的藻泥；

（b）冷冻保藏：将制备好的藻泥迅速置于4℃预冷4~12小时，然后转入到-5~-20℃冷冻保藏，保藏周期30~100天；

（c）细胞活化：将冷冻保藏的藻泥置于20℃水浴融化，然后利用0.1~1.0% w/v的氯化钠溶液，结合离心、沉降或过滤等方法洗脱冻存剂。将清洗后的藻细胞按照0.2~0.8 g/L的浓度接种到低氮BG11培养基，在弱光条件下通气培养，其中光强为10~50 μmol m^-2 s^-1，温度为15~25℃，活化时间为2~4天；

（d）虾青素诱导：藻细胞完成活化培养后，培养基中的氮基本消耗完毕，此时加入浓度为10~100 mM的碳源，并将藻液置于室外光生物反应器中进行诱导培养以积累虾青素，培养周期为5~10天。

2.按照权利要求1所述的一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于：所述步骤（a）中的冻存液为浓度1~20% v/v的DMSO或甘油，使用前需要4℃预冷。

3.按照权利要求1所述的一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于：所述步骤（a）中的搅拌、离心操作需要在4℃进行

4.按照权利要求1所述的一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于：所述步骤（a）中的藻泥的含水率为70~90% w/w。

5.按照权利要求1所述的一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于：所述步骤（c）中的低氮BG11培养基氮源为硝酸盐，浓度为0.5~2 mM。

6.按照权利要求1所述的一种雨生红球藻绿色细胞保藏以及虾青素诱导的规模化生产方法，其特征在于：所述步骤（d）中的碳源包括碳酸氢盐、碳酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乙醇中一种或多种。