[发明专利]一种利用乳中柠檬酸诊断奶牛产后酮病的方法

说明书

本发明提供一种利用乳中柠檬酸诊断奶牛产后酮病的方法，所述乳中柠檬酸对奶牛酮病时酮体改变比较敏感,通过检测乳中柠檬酸含量来诊断奶牛酮病，阐明能量代谢特征性指标与乳中柠檬酸之间的关系，表明乳中柠檬酸与奶牛酮病重要检测指标BHBA、NEFA呈极显著正相关，乳中柠檬酸可以作为体外检测酮病的指标来监测、诊断奶牛酮病，当乳中柠檬酸大于0.205%时可以诊断奶牛患有酮病。

技术领域

本发明涉及一种诊断奶牛产后酮病的方法，特别是一种利用乳中柠檬酸诊断奶牛产后酮病的方法。

背景技术

随着全球畜牧业的大力发展，奶牛业已经成为支持畜牧业发展的一个重要产业。奶牛酮病是围产期最常见的一种营养代谢病，尤其高产奶牛多发，世界各地均有流行，虽然很少能造成死亡，但会引起奶牛产奶量降低，增加治疗费用，同时酮病奶牛产出的牛奶成分会发生变化，可能会对人体产生不良影响，给很多高产的大型牛场带来严重的经济损失，所以奶牛酮病越来越受到养殖者们的重视。

柠檬酸，又称枸橼酸、2-羟基丙三羧酸，在机体三羧酸循环中由乙酰辅酶A和草酰乙酸羧合而成，参与体内糖、脂肪和蛋白质代谢。已有研究表明在奶牛发生酮病时，患病奶牛产出的牛奶成分会发生变化，前人对健康奶牛与患酮病奶牛血浆进行核磁共振（1HNuclear Magnetic Resonance，1H NMR），分析发现酮病奶牛血浆中的柠檬酸会发生显著变化，与此同时有人提出在奶牛发生酮病时，乳中的柠檬酸也会发生变化。

目前酮病的监测主要是根据血液中β-羟丁酸（BHBA）浓度变化，当BHBA>1.2mmol/L时可诊断为奶牛患有酮病，此种方法虽然准确率高，但其检测费用大，容易受外界因素影响，需要采集血液进行检测；采集血液会对奶牛造成应激性的伤害。因此需要寻找灵敏度高、对奶牛无伤害的一种诊断奶牛产后酮病的方法。

发明内容

本发明提供一种利用乳中柠檬酸诊断奶牛产后酮病的方法，所述乳中柠檬酸对奶牛酮病时酮体改变比较敏感,通过检测乳中柠檬酸含量来诊断奶牛酮病，阐明能量代谢特征性指标BHBA与乳中柠檬酸之间的关系，表明乳中柠檬酸与奶牛酮病呈极显著正相关。

本发明所采用的技术方案是：一种利用乳中柠檬酸诊断奶牛产后酮病的方法，乳中柠檬酸与奶牛酮病密切相关，应用乳成分分析仪和全自动生化分析仪测定牛乳中柠檬酸、乳脂；血清中BHBA、NEFA的含量, 通过统计学分析乳中柠檬酸与BHBA、NEFA、乳脂呈极显著正相关（P<0.01）,当乳中柠檬酸大于0.205% 时可以诊断奶牛患有酮病。

上述方案中实验动物数量、检测指标柠檬酸、BHBA、NEFA、乳脂均具有统计学意义；对实验数据进行Person相关性分析发现，乳中柠檬酸与BHBA、NEFA、乳脂含量均呈极显著的正相关（P<0.01），相关系数分别为r=0.450,p=0.000；r=0.504，p=0.000；r=0.315，p=0.006.对酮病组与健康组实验数据进行独立样本T检验，结果表明酮病组BHBA、NEFA、柠檬酸均极显著的高于健康组（P<0.01）。对两组实验数据进行ROC曲线预警分析，曲线下面积为0.755,柠檬酸对酮病的预警值为0.205%,当乳中柠檬酸大于0.205% 时，可以诊断奶牛患有酮病。

本发明具有的有益效果是：本发明基于上述背景通过对酮病奶牛与健康奶牛乳汁中柠檬酸含量、血液中BHBA、NEFA含量进行Person相关性分析与ROC曲线分析,明确奶牛发生酮病时乳汁中柠檬酸变化规律，确定乳汁中柠檬酸与奶牛发生酮病时特异性生化指标BHBA、NEFA呈极显著正相关（P<0.01），乳汁中柠檬酸可以以一种体外检测酮病的指标来更准确更方便的监测、诊断奶牛酮病，当乳中柠檬酸大于0.205% 时可以确定奶牛患有酮病，此方法可以避免采血对奶牛造成的伤害，而又较早的监测出酮病，会减少奶牛养殖业的损失。