[发明专利]一种流式细胞术的细胞样品制备新方法

说明书

本发明公开了一种关于流式细胞检测技术的细胞样品制备新方法，改进传统细胞样品制备流程，创新性地通过“充分固定‑温和透膜‑保护性细胞洗涤”这一实验流程，获得良好的细胞样品完整性，最大限度保持流式细胞术检测过程中完整细胞的得率，能够显著提高细胞内蛋白质分子的检测效率，确保实验结果的可重复性。该样品制备方法适用于人体来源的各种细胞包括肿瘤细胞，特别是在人体组织中可检测细胞的数量比较少的情况下，可以在不破坏细胞完整结构的基础上，有效地检测细胞质或细胞核里的蛋白分子。这种新的细胞样品制备方法可广泛应用于基础研究和临床研究中对细胞内蛋白分子的流式细胞检测。

技术领域

本发明涉及生物样品检测领域，特别是涉及流式细胞检测技术。

背景技术

流式细胞术是一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数的科学技术。研究者根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。目前流式细胞术最高分选速度已达到每秒钟3万个细胞。流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。然而通过对现有的流式细胞术的研究发现，该技术目前存在着细胞容易破碎、着色效果差不易分流等不足。特别是在检测细胞内蛋白含量的时候，传统的细胞样品制备方法容易破坏细胞结构，导致样品中能够被检测到的细胞数量的减少，降低实验的可重复性和数据的完整性。这正是此次提出申请所要解决的问题。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种流式细胞术的细胞样品制备新方法，能够解决细胞容易破碎、着色效果差不易分流等问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：改进传统细胞样品制备流程，通过“充分固定-温和透膜-保护性细胞洗涤”这一常用流程获得较好的细胞样品完整性预处理。其中在温和透膜过程中，利用我们配置的新型透膜试剂，可以在90秒内快速完成细胞样品的透膜处理并使细胞损失减到最低。该方案的特征在于通过更换实验试剂和调整实验处理时间来实现比较好的细胞处理效果，从而区分于此前的实验方法。

本发明的有益效果是：最大限度保持流式细胞术检测过程中细胞样品的完整性，显著提高检测的效率，保证实验结果的可重复性。

附图说明

图1为传统细胞样品制备方法/阴性对照组(Negative ctrl)

总计数量1761，其中活细胞数(P1部分)86，占比4.88％.

图2为传统细胞样品制备方法/SOX-2抗体组

总计数量1145，其中活细胞数(P1部分)52，占比4.54％.

图3为新的细胞样品制备方法/阴性对照组(Negative ctrl)

总计数量6004，其中活细胞数(P1部分)1476，占比24.58％.

图4为新的细胞样品制备方法/SOX-2抗体组

总计数量5888，其中活细胞数(P1部分)901，占比15.30％.

图5为新的细胞样品制备方法/阴性对照组(Negative ctrl)

总计数量19065，其中活细胞数(P1部分)5294，占比27.77％.

图6为新的细胞样品制备方法/SOX-2抗体组

总计数量20039，其中活细胞数(P1部分)5000，占比24.95％.