[发明专利]在荧光微球表面定向包被抗体的方法及其在糖化载脂蛋白A1检测中的用途有效
| 申请号： | 201611227071.0 | 申请日： | 2016-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN106841633B | 公开（公告）日： | 2019-04-30 |
| 发明（设计）人： | 郑乐民;段学军;赵明明;王洋;刘昌杰;闫宝山;何萌萌;路美玲;彭明辉;李瑶;李国帅 | 申请（专利权）人： | 郑乐民;福建普立辰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 耿超;王浩然 |
| 地址： | 350015 福建省福州市马尾区*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 表面 定向 包被 抗体 方法 及其 糖化 脂蛋白 a1 检测 中的 用途 | ||
1.一种在荧光微球表面定向包被抗体的方法，其特征在于，所述方法包括如下(1)-(6)方法中的一种或多种：
(1)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；
(2)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为0.8mg/mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为9mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；
(3)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1.2mg/mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为11mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；
(4)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将4.8mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:300，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；
(5)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将1.2mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:75，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；
(6)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球。
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