[发明专利]寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体及构建及应用

说明书

本发明公开了一种寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体及构建及应用，寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体MBP‑ZIKV_capcid_pET22b中所述MBP‑ZIKV_capcid的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示。本发明利用MBP基因与寨卡病毒衣壳蛋白基因进行刚性融合能在体外大量表达和纯化寨卡病毒衣壳蛋白，寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体转化到宿主细胞后，克服了现有技术寨卡病毒衣壳蛋白单个蛋白的蛋白表达水平低和蛋白高聚的问题，蛋白溶解度提高﹑使蛋白纯化容易，能高效获得寨卡病毒衣壳蛋白，为纯化该蛋白及其相关种属蛋白提供了新技术，可用于医疗检测和生物学功能实验相关产品的开发。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体为一种寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体及构建及应用。

背景技术

黄病毒科(Flaviviridae)包括肝炎病毒、瘟病毒和黄热病毒3个属,黄热病毒属病毒简称黄病毒,包括约68种病毒,其中多数(约38种病毒)与人类疾病有关,如登革(DEN)、黄热(YF)和寨卡(ZIKA)等病毒严重影响着人类健康。近年来，全球登革热感染的病例急剧增加。该疾病在非洲，美洲，东地中海，东南亚和西太平洋的100多个国家是地方性的。据报导全世界每年约50-1000万例的DENV(登革热病毒)感染，约50万例出血热需要住院治疗和25,000例死亡。黄热病在非洲和拉丁美洲的45个国家流行，全世界约20万人感染，有30,000人死亡。寨卡病毒最早于1947年从乌干达森林中的猕猴身上分离出来。1952年首次从人体分离出来。截至上世纪末，寨卡病毒感染被认为仅在赤道周围的非洲、美洲、亚洲和太平洋地区散发，被证实的人类感染病例仅14例。该病毒自2007年开始出现暴发流行。2015年底至2016年初，美洲出现寨卡疫情，并通过旅游者输入到其他国家。截至2016年2月，美洲、非洲、亚洲等地已有超过30个国家出现寨卡病毒传播。

寨卡病毒基因组为长约10kb的单股正链RNA,由单一的开放读码框(ORF)编码一多聚蛋白(poly protein),经病毒和宿主蛋白酶对其进行协同翻译和翻译后加工,最后形成3种结构蛋白(C、PrM和E)和7种非结构蛋白。其中C又称衣壳蛋白位于病毒颗粒内部,与基因组RNA共同构成病毒核衣壳。它在病毒RNA衣壳化和病毒颗粒组装过程中起重要作用。Jones等研究发现黄病毒衣壳蛋白(包括寨卡病毒衣壳蛋白)单个蛋白的蛋白表达水平低，溶解度差及纯化困难(Jones C T,Ma L,Burgner J W,et al.Flavivirus capsid is a dimericalpha-helical protein.[J].Journal of Virology,2003,77(12):7143-9.)。而刚性融合是通过刚性连接肽将两个蛋白相连接，是一类有稳定二级结构的不易弯折的连接肽。注重多肽的二级结构和螺旋后的空间长度，能有效分隔功能蛋白的功能域。可以通过控制氨基酸排列来有效控制两端蛋白的距离。MBP是麦芽糖结合蛋白，MBP融合蛋白具有表达效率高、易于纯化等优点。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的寨卡病毒衣壳蛋白单个蛋白的蛋白表达水平低，溶解度差及纯化困难的问题，提供一种寨卡病毒衣壳蛋白表达量高、溶解度有所提高的寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体。

本发明的第二个目的是提供一种操作纯化方便的寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种含有寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体的宿主细胞。

本发明的第四个目的是提供上述宿主细胞在表达寨卡病毒衣壳蛋白中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体MBP-ZIKV_capsid_pET22b，所述MBP-ZIKV_capsid的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示。

寨卡病毒衣壳蛋白刚性融合表达载体MBP-ZIKV_capsid_pET22b的构建方法，包括如下步骤：