[发明专利]一种去氢甲睾酮抗原及其制备方法和检测试纸卡

说明书

本发明涉及一种去氢甲睾酮抗原及其制备方法和检测试纸卡，属于免疫化学检测技术领域。本发明提供的去氢甲睾酮包被抗原制备得到的试纸卡，包括塑料盒体，所述塑料盒体一端设置有加样孔，设置在所述塑料盒体中的试纸条，所述试纸条包括支撑层，设置在所述支撑层上的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线处设置有去氢甲睾酮包被抗原，所述质控线处设置有羊抗鼠IgG，所述结合垫上灌注有胶体金标记的抗去氢甲睾酮特异性单克隆抗体。本发明提供的去氢甲睾酮包被抗原制备得到的试纸卡操作简便，灵敏度高，特异性强，易于大范围推广应用。

技术领域

本发明涉及免疫化学检测技术领域，具体涉及一种去氢甲睾酮抗原及其制备方法和检测试纸卡。

背景技术

去氢甲睾酮(1-dehydro-17a-methyltestosterone，DMT)，又名大力补、美雄酮，是一种人工合成的促蛋白同化类固醇激素。DMT能促进蛋白质合成、维持正氮平衡、增进食欲、促进钙磷在骨组织中沉积和新生组织的形成，因而在医学临床上常用于治疗再生障碍性贫血、男性发育迟缓、骨折及烧伤处理、手术后慢性消耗性疾病、老年骨质疏松和肿瘤恶液汁病等。DMT还具有促进动物体内营养物质沉积和改善生产性能的作用，在畜牧业生产中被用作饲料添加剂，以促进动物生长，提高瘦肉率。运动员服用DMT后能增强肌肉力量和体力，提高比赛成绩，因而也被违法应用到运动会和动物竞技比赛中。

但DMT是一种蛋白同化激素，长期或大量服用会对人体有很多副作用，导致肝功能障碍、生殖功能紊乱，增加患心血管疾病的风险等。蛋白同化激素用作饲料添加剂时，会在动物体内残留。当人们长期食用含有该药物残留的动物性食品时，同样会造成人类生殖系统障碍、发育异常，提高乳房癌、睾丸癌等发病机率，严重危害人类健康。因此，欧盟自1986年以来就禁止在肉食性动物生产中以促进生长为目的使用人工合成的促蛋白同化激素。我国农业部2002年4月发布的《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中也明确规定性激素类原料药及其单方、复方制剂产品不准以抗应激、提高饲料报酬、促进动物生长为目的在饲养过程中使用。

这就要求对食源性动物进行严格的激素滥用监控，以保护消费者的合法权益。DMT残留常用的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，气相色谱－质谱法(GC-MS)和液相色谱－质谱法(LC-MS)等。这些方法灵敏度高，定性准确，可以确定化合物的分子量、分子式，甚至官能团，适合定量检测DMT含量。但这些方法成本高，需要专业的技术人员，昂贵的实验仪器及长时间的前期准备工作。而免疫学检测方法建立在抗体对抗原的分子识别上，其主要优点是抗原抗体的亲合力高、检测快速、经济实用，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，是最灵敏的方法之一。

胶体金标记免疫分析法简便快速、成本低、无污染、无需培训，但现有去氢甲睾酮胶体金标记免疫检测方法灵敏度仍较低，一种能够实现去氢甲睾酮高灵敏度检测的抗原的研制对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去氢甲睾酮抗原及其制备方法和检测试纸卡。本发明提供的去氢甲睾酮抗原及其检测试纸卡操作简单、快速准确、灵敏度高、特异性强、成本低、稳定性好，可进行批量检测。

本发明提供了一种去氢甲睾酮包被抗原，为去氢甲睾酮-鸡卵清白蛋白偶联物，具有式Ⅰ所示结构：

式I中，OVA为鸡卵清白蛋白。

本发明还提供了上述技术方案所述包被抗原的制备方法，包括以下步骤：

1)将去氢甲睾酮溶于无水吡啶，得到去氢甲睾酮溶液；

2)将所述去氢甲睾酮溶液与琥珀酸酐混合，在45～60℃避光进行酯化反应30～40h，得到去氢甲睾酮衍生物；

3)将所述去氢甲睾酮衍生物溶解后进行酸化，得到去氢甲睾酮-琥珀酸酯；