[发明专利]液质联用快速测定鱼肉中河鲀毒素含量的方法

权利要求书

1.液质联用快速测定鱼肉中河鲀毒素含量的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)样品预处理

活鱼冷冻处死，去皮，取其肌肉部分50g，加入肌肉重量10-20％的硅藻土，经均质制样机充分粉碎，均质粉碎20-25min，然后放入-80℃冰箱中冷冻2-3h；

冷冻结束后称取试样(1.00±0.01)g于50mL聚丙烯离心管中，准确加入2-3g氯化钙和1.0％乙酸甲醇溶液5-10mL，均质30-100s，用细胞破碎仪在60℃超声提取20-40min，8000r/min离心5min，转移上清液至另一洁净离心管中；残渣用3mL的1％乙酸甲醇溶液重复提取1次，合并上清液并于4℃10 000r/min离心5min，所得上清液待净化；

取1.0mL上清液过Carbon-GCB石墨化碳黑SPE固相萃取小柱，控制流速2mL/min,弃去流出液；再取1mL上清液以2mL/min流速通过小柱，流出液过0.22μm聚四氟乙烯-尼龙复合膜，收集于进样小瓶，供HPLC-MS/MS测定；

(2)色谱-质谱条件

1.色谱条件色谱柱：Zic-Hilic(100mm×2.1mm i.d.，3.5μm)；

流动相A为0.1％甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵)；

流动相B为95％乙腈(含5mmol/L甲酸铵的0.1％甲酸水溶液)；

洗脱程序为：0-5min，从20％线性递增到95％；5-7min，7-7.01min从95％线性递减至20％；7.01-12min，平衡6min；进样量：10μL；流速0.35mL/min；柱温：30℃；

TTX的液相色谱梯度洗脱条件

时间(min)流速(μL/min)A相(％)B相(％)0.035020805.03509557.03509557.01350208012.03502080

2.质谱条件离子源及扫描方式：ESI⁺；检测模式：MRM；碰撞气流量：12L/min；气帘气流量：10L/min；TTX的质谱定性、定量离子对分别为320.2/162.1和320.2/302.2，相应碰撞能分别为32V和47V；质谱峰保留时间在6.06，驻留时间和电喷雾电压分别为200ms和5000V，离子源温度为600℃，各质谱参数见下表：

TTX保留时间、定性定量离子对、去簇电压和碰撞能量

*定量离子对。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)样品预处理的粉碎过程中加入硅藻土的同时，加入10mL 0.1mol/L盐酸溶液。