[发明专利]将单个核细胞复苏并诱导为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法

说明书

本发明公开了将单个核细胞复苏并诱导为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法。该方法包括：将冷冻保存的单个核细胞置于37‑42℃水浴中融化，以便得到融化的单个核细胞；将所述融化的单个核细胞与用于多种细胞因子诱导的杀伤细胞的冷冻复苏液混合，以便得到复苏细胞混合液，其中，所述冷冻复苏液包含白蛋白和右旋糖酐；将所述复苏细胞混合液进行离心处理，以便得到复苏细胞；以及将所述复苏细胞进行定向诱导处理，以便得到诱导后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞。该方法复苏得到的单个核细胞，在后续的诱导、扩增过程中，获得的多种细胞因子诱导的杀伤细胞增殖速率快，诱导分化效率高，细胞活性好。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地，将单个核细胞复苏并诱导扩增为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法。

背景技术

多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkiller，CIK)，为人血液中的单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导、扩增获得的一群异质细胞。该细胞同时表达CD3+和CD56+两种细胞膜表面标志，故称为NK细胞样T淋巴细胞，具有T淋巴细胞活性和NK细胞的非MHC限制性。因此，可用于激活机体免疫系统，提高机体的免疫力；CIK细胞能够分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种细胞因子，对白血病、淋巴瘤、肺癌、胃癌、肠癌治疗，防止肿瘤复发与转移，提高患者生活质量发挥了重要作用。CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中少见，仅1％—5％，数量少。为了获得更多的CIK细胞，并满足择期应用的需求，将正常人外周血或脐血等中单个核细胞冷冻保存，需要时进行复苏并诱导、扩增，可获得大量的CIK细胞。复苏冷冻保存的细胞，常使用含胎牛血清的培养基作为复苏液。由于胎牛血清为动物来源，不适于细胞产品的临床应用。因此，摸索一种有利于CIK细胞诱导、扩增的方法，成为目前亟待解决的问题

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种将单个核细胞复苏并诱导为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法，利用包含白蛋白和右旋糖酐冷冻复苏液复苏的单个核细胞，诱导、扩增形成多种细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖速率快，诱导分化效率高，细胞活性好。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种将单个核细胞复苏并诱导为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将冷冻保存的单个核细胞置于37-42℃水浴中融化，以便得到融化的单个核细胞；将所述融化的单个核细胞与用于多种细胞因子诱导的杀伤细胞的冷冻复苏液混合，以便得到复苏细胞混合液，其中，所述冷冻复苏液包含白蛋白和右旋糖酐；将所述复苏细胞混合液进行离心处理，以便得到复苏细胞；以及将所述复苏细胞进行定向诱导处理，以便得到诱导后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞。

根据本发明的实施例的将单个核细胞复苏并诱导为多种细胞因子诱导的杀伤细胞的方法，采用含有白蛋白和右旋糖酐的冷冻复苏液复苏得到的单个核细胞，在后续的诱导过程中，诱导形成多种细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖速率快，诱导分化效率高，细胞活性好。

另外，根据本发明上述实施例的冷冻复苏液还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述白蛋白为人白蛋白。

根据本发明的实施例，所述人白蛋白来源于市售人血清白蛋白或自体血浆。

根据本发明的实施例，所述白蛋白的含量为1-5％。根据本发明的优选实施例，所述白蛋白的含量为2.5％。

根据本发明的实施例，所述右旋糖酐为右旋糖酐40。

根据本发明的实施例，所述右旋糖酐的含量为2-8重量％。根据本发明的优选实施例，所述右旋糖酐的含量为5重量％。

根据本发明的实施例，所述融化的单个核细胞与所述冷冻复苏液混合的体积比为1：0.5-5。根据本发明的优选实施例，所述融化的单个核细胞与所述冷冻复苏液混合的体积比为1：1。