[发明专利]特异性靶向LAG-3基因的sgRNA和特异性敲除LAG-3基因的方法

权利要求书

1.基于CRISPR特异性靶向人LAG-3基因的sgRNA，其特征在于：基于Cas9的sgRNA的序列如SEQ ID NO.49所示。

2.一种基因编辑载体，其特征在于，包含权利要求1所述sgRNA；权利要求1所述sgRNA连接于初始载体PMH001-Cas9，所述PMH001-Cas9的核苷酸序列如SEQ ID NO.478所示。

3.一种基因重组病毒颗粒，其特征在于，所述病毒颗粒包含权利要求1所述sgRNA或权利要求2所述载体；所述病毒可选自逆转录病毒，慢病毒，腺病毒，腺相关病毒中的一种或几种。

4.一种基于CRISPR系统特异性敲除人LAG-3基因的方法，其特征在于，包含如下步骤：

1)基于Cas9的sgRNA来自权利要求1；

2)构建合成步骤1)所述sgRNA的寡聚核苷酸双链；

3)将步骤2)所述sgRNA的寡聚核苷酸双链连接入带有Cas9内切酶的表达载体，鉴定阳性克隆，获得基因编辑载体；

4)将步骤3)获得的基因编辑载体转入人类细胞中，即可完成对LAG-3基因的敲除。

5.根据权利要求4所述方法获得的人类细胞，其特征在于，所述人类细胞不包含胚胎干细胞。

6.根据权利要求5所述人类细胞，其特征在于，所述细胞为人类T细胞。

7.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述sgRNA，和/或权利要求2所述基因编辑载体，和/或权利要求3所述病毒颗粒，和/或权利要求5或6所述细胞。

8.权利要求1所述sgRNA、权利要求2所述载体、权利要求3所述病毒颗粒、或权利要求5或6所述细胞在用于制备治疗人肿瘤的药物和/或制剂中的用途，所述肿瘤选自肺癌、胃癌、肝癌或乳腺癌。