[发明专利]一种甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR检测及预警方法

说明书

本发明公开了一种甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR检测及预警方法。本发明了针对SPCSV和Sweepoviruses两类病毒，设计特异性引物对CP‑F和CP‑R、引物对VF和VR，检测引物具有很好的特异性，仅能从目标病毒样品中扩增到特异大小的条带。本发明利用多重PCR引物建立的甘薯SPCSV和Sweepoviruses病毒的检测方法，能够通过一次PCR反应，同时检测甘薯块根中是否存在SPCSV和Sweepoviruses两类甘薯病毒，建立了一种根据甘薯种薯是否带毒，进一步判断种薯质量的预警方法。本发明明确了甘薯块根带毒与甘薯苗期、大田期病毒症状及产量损失的关系，为通过检测种薯是否携带病毒，进而判断种薯质量是否合格提供了依据，对于脱毒甘薯种薯质量和病害流行预警具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR检测引物、方法及脱毒种薯质量预警方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

甘薯是我国重要的粮食作物，也是重要的食品加工和工业原料。我国是世界上最大的甘薯生产国，甘薯种植面积占全世界种植面积的45％左右。病毒病是危害甘薯的一类重要病害，可造成严重的产量损失和种性退化。目前全世界已报道侵染甘薯的病毒有30余种，其中，甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)和甘薯双生病毒(Sweepoviruses)是侵染甘薯的两类重要病毒，SPCSV侵染甘薯一般可引起15-88％的产量损失，特别是SPCSV可与多种病毒复合侵染甘薯形成协生病害，引起更严重的产量损失，甚至绝收。侵染甘薯的菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)病毒与侵染其它植物的Begomovirus明显不同，把这类病毒称之为“Sweepoviruses”。Sweepoviruses是甘薯上的一类重要病毒，据研究，我国甘薯上至少存在10种Sweepoviruses，包括SPLCV、SPLCCNV、SPLCGoV、SPLCCaV、SPLCShV、SPLCCSV、SPLCHnV、SPLCHnSV、SPLCGxV和SPLCJsV。甘薯双生病毒侵染甘薯一般可引起11-86％的产量损失，对甘薯生产危害很大。目前对甘薯病毒病尚无特别有效的化学防治方法，种植脱毒甘薯是防治病毒病最经济有效的方法。在培育和推广种植脱毒甘薯的过程中，需要对脱毒种薯种苗进行严格的病毒检测，只有经过检测不含病毒，特别是不含SPCSV和Sweepoviruses的种薯种苗才能在生产上推广应用，否则会引起产量损失和病毒病的流行和扩散蔓延。目前对SPCSV和Sweepoviruses的检测主要采用血清学方法或单一PCR方法。单一PCR方法需多次进行PCR，成本高，效率低，特别是甘薯块根中由于淀粉和多糖含量高，严重影响核酸提取质量和病毒的检测效率。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR检测及预警方法，该方法一次PCR反应，可检测甘薯块根中是否存在SPCSV和Sweepoviruses两类甘薯病毒，有效地提高了检测效率，降低了检测成本。同时，本发明可通过检测种薯是否携带病毒，进而判断种薯质量是否合格，为脱毒甘薯种薯质量预警提供了一种方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种检测甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR引物，所述的多重PCR引物包括引物对CP-F和CP-R、引物对VF和VR；其中，各引物对的序列如下：

CP-F：5’—ACGAGTATGGCTGATAGCACTAA—3’

CP-R：5’—GTGAAGACCTGTTCCAGTCAACT—3’

VF：5’—GTAAGCGTGTTTGTGTGAAGT—3’

VR：5’—TCCATTCGGATCTTAGCAGTAGT—3’。

一种甘薯块根中甘薯褪绿矮化病毒和甘薯双生病毒的多重PCR检测方法，包括以下步骤：