[发明专利]一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法

说明书

一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法，其特征在于：采用动物口鼻式吸入烟气暴露系统将动物实时暴露于烟气中，通过在线微透析技术收集动物脑组织样品，再利用高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器对脑透析液样品中的单胺类神经递质及其代谢物进行快速分析，从而实时监测烟气暴露前后动物脑内单胺类神经递质的变化特征。本方法对动物的烟气暴露更加接近于人类吸食烟草制品的方式，克服了无法实时模拟、评价烟气吸入（烟碱摄入）引起的单胺神经递质变化的技术难题，具有操作简便、结果准确可靠等优点，与现有技术相比取得了明显进步，开创了一种新的用于烟气暴露后动物脑内单胺类神经递质代谢变化的监测方法。

技术领域

本发明涉及实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化分析的方法，本方法通过在线微透析技术收集实时暴露于烟气中的实验动物脑组织样品，再利用高效液相色谱-库仑阵列电化学检测器对脑透析液样品中的单胺类神经递质及其代谢物进行快速的在线分析，从而实时评价烟气吸入暴露前后单胺类神经递质的变化特征。

背景技术

卷烟烟气和电子烟气溶胶都含有烟草的重要特征成分——烟碱（Nicotine）。烟碱依赖的发生是吸烟成瘾的主要原因，也是持续吸食烟草制品进而危害健康的根本原因。摄入体内的烟碱能迅速透过血脑屏障并广泛分布于脑组织各区域，其主要作用于中脑边缘多巴胺（Dopamine, DA）系统而产生奖赏效应。事实上，包括DA、5-羟色胺（5-HT）等单胺类神经递质都参与了烟碱神经药理学效应的发生过程。因此，开发一种新的检测方法能够对烟气暴露引起的动物脑内单胺类神经递质的释放及代谢变化进行准确测定和实时评价，将为揭示吸烟成瘾的发生机理提供重要的手段支撑。

生物样品中单胺类神经递质的测定多采用高效液相色谱-电化学检测法（HPLC-ECD），其中高效液相色谱-库仑阵列电化学检测器因其多通道响应而呈现出的高选择性和高灵敏度，应用较为广泛。采用在线微透析技术(Online microdialysis)与HPLC-ECD联用可以实现对DA、5-HT等单胺类神经递质的活体、动态测定，但是该方法仅能评价药物暴露（如烟碱注射）之后引起的单胺类神经递质含量变化；采用动物整体暴露吸入烟气（将动物置于密闭的烟气舱内）的暴露方式亦无法同步完成烟气实时暴露和动物脑内单胺类神经递质的在线测定。

发明内容

本发明正是针对目前无法同步实现烟气吸入暴露和单胺类神经递质在线测定的不足，而专门开发的一种实时监测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的分析方法。本方法通过利用改造后的实验动物鼻部吸入暴露夹持器实现了动物口鼻式烟气暴露系统与微透析系统的联用，进而通过采用在线微透析与高效液相色谱-库仑阵列电化学检测器联用技术实现了对烟气吸入暴露实验动物脑组织样品的实时采集与在线测定，达到了烟气吸入暴露与脑内单胺类神经递质变化测定同步进行的技术要求。在本方法中，实验动物采用了仅口鼻吸入（nose-only）的方式暴露于烟气中，更加接近于人类吸食烟草制品的方式，克服了无法实时评价烟气吸入（烟碱摄入）引起的单胺神经递质变化的技术难题，具有操作简便、结果准确可靠等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法，采用动物口鼻式吸入烟气暴露系统将动物实时暴露于烟气中，通过在线微透析技术收集动物脑组织样品，再利用高效液相色谱-库仑阵列电化学检测器对脑透析液样品中的单胺类神经递质及其代谢物进行快速分析，从而实时监测烟气暴露前后动物脑内单胺类神经递质的变化特征,进而根据样品中DA、5-HT及其代谢物的分析检测结果实时评价烟气暴露引起的脑内单胺类神经递质变化规律。

该方法具体步骤如下：

a. 烟气暴露：利用吸烟机抽吸卷烟或采用气溶胶发生器使电子烟液产生气溶胶，将头部装有微透析探针导管的动物放入一个专用的实验动物固定夹持器，以使该夹持器挟持动物仅以口鼻吸入方式暴露于一定浓度的烟气中；